UPLC问世的原因是缩短时间，高效分离，你这个时间整这么长，不符合效率的要求。分离度不够的话，更换其他小粒径色谱柱，或者运行梯度，再不行换成长柱在HPLC上分离吧。

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2楼: Originally posted by 明月的夜 at 2017-07-09 10:14:54
UPLC问世的原因是缩短时间，高效分离，你这个时间整这么长，不符合效率的要求。分离度不够的话，更换其他小粒径色谱柱，或者运行梯度，再不行换成长柱在HPLC上分离吧。

运行梯度改了也没有效果，小粒径色谱柱是指？现在用的是waters的BEH C18色谱住……

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3楼: Originally posted by mustdone at 2017-07-09 11:40:54
运行梯度改了也没有效果，小粒径色谱柱是指？现在用的是waters的BEH C18色谱住……...

你用的BEH C18 应该是配的，好像是4.7长度，1.7um的。给你几个建议啊。
1. 有的物质比较难分离， 既然时间延长能分离，就这样吧。这样也挺好的。
2. 更换甲醇为有机相看看
3，其他1.7或3um之类的C18色谱柱。
4. 会不会是你梯度设置的不合理。

如果是UPLC的柱子，跑的时间太长了，没必要拉长，主要是看你要哪个峰

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4楼: Originally posted by 明月的夜 at 2017-07-09 12:00:52
你用的BEH C18 应该是配的，好像是4.7长度，1.7um的。给你几个建议啊。
1. 有的物质比较难分离， 既然时间延长能分离，就这样吧。这样也挺好的。
2. 更换甲醇为有机相看看
3，其他1.7或3um之类的C18色谱柱。
4 ...

现在就是延长时间也分离不了，前面4-20分钟这一段的小峰，延长时间的话会变得扁平趋近基线，在梯度变化率为0.7-1左右可以比较明显的看到小峰，但是这时候的分离都是达不到要求的；中间20-26分钟的主峰，有一个23分钟出来的夹着的小峰就是分不开，比如在22的乙腈的情况下能出来一个小尖头，走22的等度也就只有一个小尖头，往前尝试18.21，往后尝试24都会和前面的大峰合在一起……现在不知道还能够怎样来优化洗脱程序，达到分离效果了……首先要能全部分离开再说缩短时间吧。甲醇我会试试的，之前用甲醇，可能看起来出峰比较慢，我换甲醇看看。谢谢你的回复
，

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6楼: Originally posted by mustdone at 2017-07-10 18:45:29
现在就是延长时间也分离不了，前面4-20分钟这一段的小峰，延长时间的话会变得扁平趋近基线，在梯度变化率为0.7-1左右可以比较明显的看到小峰，但是这时候的分离都是达不到要求的；中间20-26分钟的主峰，有一个23分 ...

那我建议你换HPLC，用长柱试试吧

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5楼: Originally posted by xue小丸子 at 2017-07-09 17:01:10
如果是UPLC的柱子，跑的时间太长了，没必要拉长，主要是看你要哪个峰

做指纹图谱……应该事尽量要分开，然后峰尽量多的吧……