第一次做qPCR,溶解曲线出现双峰。拷贝数10^9和10^8为单峰,Tm值87℃左右,10^7开始出现双峰,10^5为单峰,但Tm值85℃左右,试了几个样品,样品也都是单峰,Tm值也在87℃左右。试过升高退火温度,但没有效果。请教各位这是什么原因啊?多谢啦~ IMG20150420173001.jpg 返回小木虫查看更多
检测过你的引物没?是否特意扩增?
及时Agrose显示的一条带,但也可能产物是差异很小的两条带,在QPCR的时候就会出现这样结果。
检测过你的引物没?是否特意扩增?
我对qPCR的产物跑过胶,条带位置是一致的,而且只有一条条带~
不知道你的反应程序。如果引物特异,那你就得参考你所做材料类似文献的反应程序了。祝好
谢谢!
及时Agrose显示的一条带,但也可能产物是差异很小的两条带,在QPCR的时候就会出现这样结果。
谢谢!那我应该怎么做呢?
你把PCR产物跑一下PAGE胶看看,浓度略高一点,跑的时间也比较长,如果还是一条带,就按照4楼说的。
另外就是重新设计引物了
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