SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳求助
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电压、电流与跑电泳时间怎么确定啊， 恒压 还是恒流 浓缩胶和分离胶浓度由什么决定啊
我做的是羊毛的溶解，附件是我的羊毛蛋白的电泳图 条件：分离胶15%, 浓缩胶5%, 垂直平板电泳, 加样量为7μL。电极缓冲液为Tris-HCl( pH 8.3)系统。电流40mA，浓缩胶电压100v，分离胶电压150v。
条带很模糊，这是什么原因啊 。是不是羊毛的溶解 分子量较杂 还是因为蛋白溶液不纯的原因呢？
我不想测很精确 只想知道一个大概的范围 你看我们的谱图 是不是只要染上色的地方 就能说是有那个范围的蛋白吗 就是4.1KD-66KD的蛋白都有吗 我们现在又买了一个14.4KD-96KD的marker 不过还是那样 很模糊，整个柱都有颜色
郁闷！
哪位做过凝胶电泳的虫友给指点一下 啊
不胜感激！
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京公网安备 11010802022153号
看你的marker跑的还是不错的，所以你的电泳可能也不存在什么问题。不知道你羊毛溶解用的是什么溶剂。。。溶解之后有煮一下变性么?
ladder跑得好，说明电泳胶、电泳液、电压电流没问题，给我的感觉是
1、拖带
样品中整个泳道都看不出明显的单条蛋白质带，说明有可能样品的制备有问题。
2、形状
样品中即使是拖带，从加样孔到后面，形状也不是呈倒梯形，而是中间有突出，所以我猜测可能有蛋白质样品在内，而且不止是一种蛋白质。
3、上样量
考马斯亮蓝染色还是比较敏感的，这么蓝，说明可能蛋白质很多，建议做一个上样量梯度，可以将样品进行2倍为一个梯度，做几个稀释梯度再上样跑，看看会不会有蛋白质条带。
4、样品处理
我跑SDS-PAGE从来不煮，所以我觉得不煮也没关系，反正已经有SDS了，但是稳妥起见，还是煮了算了，起码减少一个不确定因素。
5、浪费
一块胶10个上样孔，你有五个没用上，下次设计严谨一些，总会有些有趣的东西可以一起跑的，
不用煮了吧！我们的羊毛蛋白溶液就是在80℃下溶解得到的，不过我们加不加SDS，跑出来都是那样
Marker跑的不错，要不做个样品梯度稀释？？
样品制备有问题
你那浓缩胶是不是做得太短了
其实电压也可以调小一点，我浓缩胶15mA，分离胶25mA
marker跑的还是很不错的，我觉得1.可能是样品处理有问题，有拖尾现象，可能是样品里有小的不溶物，处理的时候先沸水煮5分钟，然后再离心5分钟。2.你的样品浓度是不有些大，上样量和浓度有关，一般是V=13/C。3.即使你没有那么多样，泳道也不要空着，空的泳道用水代替样品来跑。4.我觉得可能你的电压稍稍有点大。
溶解蛋白是不是用的盐酸胍，看你这图就像，用TCA沉淀，加点上样buffer，煮十分钟，上样量做个剃度，少上点