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高效液相中峰出在了100%有机相里怎么办?

测人参皂苷Rb1的含量 用乙腈和水 柱温35 波长203  机子是thermo的 色谱条件是用的药典的方法 但是在最后10min加了一个100%乙腈 这样好走下一针 但是 出来的图谱的东西全在乙腈为100的时候 请问是什么原因?请帮我分析一下 谢谢各位了

用户评论

你图上的峰不是在前面吗,怎么说最后出来的?

2楼: Originally posted by 名字不在 at 2017-06-15 10:09:00
你图上的峰不是在前面吗,怎么说最后出来的?
前面的那个峰可能是溶剂峰 要的那个是在最后面出来的。

那就是流动相选择的不对,换换其他流动相试试吧

兄弟你的剃度设计错误了,你好好看看药典及液相,看你有说法是A相是纯乙腈,但是梯度洗脱一般会回到原始梯度的,你的没的回去,铁定是剃度设计错误。

最后出来的东西是杂质,也许是色素。如何能认定是你的物质?

乙腈洗脱出杂质

最后出来的极性都很小了,你的样品极性如何

你最后那个峰怎么是这样的?你这是标准品怎么会是这样的峰型呢?

8楼: Originally posted by 鹤立鸡群11 at 2017-06-18 18:44:08
最后出来的极性都很小了,你的样品极性如何
我做的是标准品。样品还没做呢 就是这个样子

5楼: Originally posted by wqy1234 at 2017-06-18 16:05:46
兄弟你的剃度设计错误了,你好好看看药典及液相,看你有说法是A相是纯乙腈,但是梯度洗脱一般会回到原始梯度的,你的没的回去,铁定是剃度设计错误。
那也就是说,我是不是要从0开始的等度洗脱?

9楼: Originally posted by 蒹葭往事 at 2017-06-18 21:05:55
你最后那个峰怎么是这样的?你这是标准品怎么会是这样的峰型呢?
我也不知道,现在我也找不出问题是什么了。到底是柱前,柱中,还是柱后的问题。

5楼: Originally posted by wqy1234 at 2017-06-18 16:05:46
兄弟你的剃度设计错误了,你好好看看药典及液相,看你有说法是A相是纯乙腈,但是梯度洗脱一般会回到原始梯度的,你的没的回去,铁定是剃度设计错误。
原始梯度的意思是不是要从0开始摸液相的条件?是不是要等度洗脱?

10楼: Originally posted by 简佳sunny at 2017-06-19 08:53:30
我做的是标准品。样品还没做呢 就是这个样子
...
换换流动相

看你的描述后,我认为有问题的地方啊:
1.最后的峰(你描述为100%有机相冲出来的):看不清横坐标,貌似是60min,和你的洗脱条件对比,你在60min时将有机相从40%在0.01min内增加到100%。如果你的两相都是纯溶剂,而之前脱气不充分或者没有充氮气,有机/无极相突然大比例混合容易造成气泡,所以我怀疑这个峰里有气泡。
2.楼上回帖你说梯度最后是100%有机相是为了下一针:是连续进样吧,但是在设置洗脱条件时,需要在方法里或者每次进样前设置平衡过程。
3.你说前面的峰是溶剂峰:我认为是进样时带的一点点空气,你可以按照流速、柱体积计算一下保留时间。我看到前面有两个峰,你看看哪个是对应的死体积的峰,另一个可能是你的样品(个人猜测)。
4.纵坐标:没用过这公司的机器和软件,不知道纵坐标是否太高了;我用Waters和Agilent的,纵坐标在200 mAU以内。

15楼: Originally posted by 1078235650 at 2017-06-19 21:41:18
看你的描述后,我认为有问题的地方啊:
1.最后的峰(你描述为100%有机相冲出来的):看不清横坐标,貌似是60min,和你的洗脱条件对比,你在60min时将有机相从40%在0.01min内增加到100%。如果你的两相都是纯溶剂,而 ...
您好,看了您的回复我有几点想要回答的。
第一,每次脱气的时候我都要脱气两到三次以上,检查机子各个管道没有气泡才停止脱气,所以我想问如果真的有气泡,气泡是从哪里来的?还是进样时带的气泡?还是柱子没有冲干净还得继续冲柱子?
第二,洗脱梯度是在100%的有机相中出峰,请问这个是杂质?还是真的溶剂峰?现在我有一些辨别不出来了。
第三,我可能进样时用的最大体积20ul所以显示出来的峰比较大。

16楼: Originally posted by 简佳sunny at 2017-06-20 09:30:57
您好,看了您的回复我有几点想要回答的。
第一,每次脱气的时候我都要脱气两到三次以上,检查机子各个管道没有气泡才停止脱气,所以我想问如果真的有气泡,气泡是从哪里来的?还是进样时带的气泡?还是柱子没有冲干 ...
进样时会有一点点,UPLC不一定;另外有机/无机相大比例混合也会有。
最后的100%时出的,判断不好的话,可以改变进样量,看峰面积变化。
我比较在意的是前面看着不保留的峰,建议根据柱体积和流速计算一下哪个是死体积。

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