¡¾·ÖÏí¡¿Ã¸ÁªÃâÒßÎü¸½¼¼Êõ
øÁªÃâÒßÎü¸½¼¼Êõ
Ò»£® ʵÑéÄ¿µÄ
1¡¢ ѧϰÕÆÎÕELISAµÄÔÀíºÍ²Ù×÷·½·¨¡£
2¡¢ »æÖÆIgG ˮƽÇúÏߣ¬ÕÒ³ö·´Ó¦×î¼ÑŨ¶È¡£
3¡¢ Á˽â̽Ë÷ELISA·´Ó¦µÄ×î¼ÑÌõ¼þµÄ·½·¨¡£
¶þ¡¢ÊµÑéÔÀí
øÁªÃâÒßÎü¸½²â¶¨(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)¼¼Êõ×Ô20 ÊÀ¼Í70Äê´ú³õÎÊÊÀÒÔÀ´£¬·¢Õ¹·Ç³£Ñ¸ËÙ£¬Ä¿Ç°±»¹ã·ºÓ¦ÓÃÓÚÃâÒßѧ¡¢Ò½Ñ§¡¢ÉúÎïѧµÈÐí¶àÁìÓò¡£ELISAÊÇÒÔÃâÒßѧ·´Ó¦Îª»ù´¡£¬½«¿¹Ô¡¢¿¹ÌåµÄÌØÒìÐÔ·´Ó¦Óëø¶Ôµ×ÎïµÄ¸ßЧ´ß»¯×÷ÓÃÏà½áºÏÆðÀ´µÄÒ»ÖÖÃô¸ÐÐԺܸߵÄÊÔÑé¼¼Êõ¡£Æä»ù±¾ÔÀíÊǸù¾Ý¿¹Ô»ò¿¹ÌåÄÜÔÚÒ»¶¨Ìõ¼þϽáºÏµ½¹ÌÏàÔØÌåµÄ±íÃæÈÔ±£³ÖÆäÃâÒß»îÐÔ£¬¿¹Ô»ò¿¹ÌåÓëø½áºÏÐγɵĽáºÏÎïÈÔÄܱ£³ÖÃâÒßѧºÍøµÄ»îÐÔ¡£½áºÏÎïÓëÏàÓ¦µÄ¿¹Ô¡¢¿¹Ìå½áºÏºó£¬¿É¸ù¾Ý¼ÓÈëÏàÓ¦µÄøµ×ÎïµÄÑÕÉ«·´Ó¦À´ÅжÏÓÐÎÞÏàÓ¦µÄÃâÒß·´Ó¦£¬¶øÇÒÑÕÉ«µÄÉîdzÓëÏàÓ¦µÄ¿¹Ô»ò¿¹ÌåµÄÁ¿ÔÚÒ»¶¨µÄ·¶Î§ÄÚ³ÉÕý±È¡£ÓÉÓÚ¿¹Ô¡¢¿¹ÌåµÄ·´Ó¦ÔÚ1 ÖÖ¹ÌÏàÔØÌ塪¡ª¾Û±½ÒÒϩ΢Á¿µÎ¶¨°åµÄ¿×ÖнøÐУ¬Ã¿¼ÓÈëÒ»ÖÖÊÔ¼Á·õÓýºó£¬¿Éͨ¹ýÏ´µÓ³ýÈ¥¶àÓàµÄÓÎÀë·´Ó¦Î´Ó¶ø±£Ö¤ÊµÑé½á¹ûµÄÌØÒìÐÔÓëÎȶ¨ÐÔ¡£ÔÚʵ¼ÊÓ¦ÓÃÖУ¬Í¨¹ý²»Í¬µÄÉè¼Æ£¬¾ßÌåµÄʵÑé²½Öè¿ÉÓжàÖÖ£¬ÈçÓÃÓÚ¼ì²â¿¹ÌåµÄ¼ä½Ó·¨¡¢ÓÃÓÚ¼ì²â¿¹ÔµÄË«¿¹¼ÐÐÄ·¨¡¢ÓÃÓÚ¼ì²âС·Ö×Ó¿¹Ô»ò°ë¿¹ÔµÄ¿¹Ô¾ºÕù·¨µÈµÈ¡£³£ÓõÄÊǼä½ÓELISA·¨£¨¼ûͼ19£1£©ºÍË«¿¹¼ÐÐÄELISA·¨¡£
Èý£®ÊµÑéÒÇÆ÷ºÍÊÔ¼Á
1¡¢ ÒÇÆ÷
ø±êÒÇ£¨ELISA Reader£©£¬Î¢Á¿¿Éµ÷¼ÓÑùÆ÷1Ì×£¨10¡¢20¡¢100¡¢200¡¢1000 ¦ÌL£©£¬ºãÎÂÅàÑøÏ䣬pH ¼Æ£¬³åÏ´Æ÷£¨»òÏ´°â»ú£©£¬Ï´µÓÆ¿£¬¿µÊϹܣ¬50 mLÉÕ±£¬Îü¹Ü¡£96¿×ø±ê°å»ò64 ¿×ø±ê°å¡£
2¡¢ÊÔ¼Á
1£©°ü±»Òº£º0.05 M pH9.6̼ËáÑλº³åÒº£¨Na2CO3 1.59 g, NaHCO3 2.93 g, ¼ÓË®ÖÁ1000 mL£¬4¡æ¿É±£´æ1ÖÜ£©¡£
2£© ±ÕÒº£º5£¥ ÍÑÖ¬ÄÌ·Û»ò0.3£¥ BSA
3£©Ï´µÓÒº£º0.15 M pH7.4 PBS-T£¨0.2 g KH2PO4,2.9 g Na2HPO4•12H2O,8 g NaCl, 0.2 g NCl,0.5mL Tween-20,¼ÓË®ÖÁ1000 mL£¬4¡æ±£´æ£©
4£©µ×ÎïÒº£ºpH5.0 µÄÁ×ËáÑÎ-ÄûÃÊËỺ³åÒº£¨0.1 M ÄûÃÊËá24.3 mL£¬0.2 MÁ×ËáÑÎ25.7 mL£¬¼ÓË®50 mL£¬»ìÔÈ£©£¬ ÁÙÓÃÇ°£¬ÔÚÉÏÊö»º³åÒºÖÐÈܽâ40 ºÁ¿ËÁÚ±½¶þ°·£¨Ortho-Phenglendiaruine, OPD£©£¬È»ºó¼ÓÈë30%Ë«ÑõË®0.15 ºÁÉý£¬µ×Îï¶Ô¹âÃô¸Ð£¬ÐèÒª±Ü¹â²¢Á¢¼´Ê¹Óá£
5£© ÑôÐÔ¶ÔÕÕÒº£º1£º100ÓÃHATÅàÑø»ùÏ¡Ê͵ÄСÊóѪÇå¡£ÒõÐÔ¶ÔÕÕҺΪHATÅàÑø»ù
6£© À±¸ù¹ýÑõ»¯Îïø±ê¼ÇµÄÑò¿¹ÊóIgG ø±ê½áºÏÎï¡£
7£© 2 M H2SO4
8£© ¿¹ÔÈÜÒº
ËÄ£®ÊµÑé²½Öè
1£®¿¹Ô°ü±»
È¡½à¾»µÄ¾Û±½ÒÒϩ΢Á¿Ã¸±ê°å£¬ÓÚÿ¿×ÄÚ¼Ó¿¹Ô0.1 ºÁÉý£¨Óðü±»»º³åҺϡÊÍ£¬µ°°×
º¬Á¿10¦Ìg/mL£©£¬ÖÃ4¡æ¹ýÒ¹£¬ÓÃÏ´µÓҺϴ3 ´Î£¬Ã¿´Î3 min¡£
2£®·â±Õ
ÿ¿×¼Ó·â±ÕÒº100¦ÌL£¬37¡æ·ÅÖÃ30 min¡£Ï´µÓ3 ´Î¡£
3£®¼Ó´ý²âѪÇå
ÓÚÿ¿×ÄÚ·Ö±ð¼Ó²»Í¬Ï¡ÊͶȣ¨Èç1£º5£¬1£º10£¬1£º20¡1£º80£©µÄ´ý²âѪÇ壬PBS¿Õ°×¶ÔÕÕ£¬ÒõÐÔ¶ÔÕÕѪÇ壬ÑôÐÔ¶ÔÕÕѪÇå¸÷100 ¦ÌL¡£ÖÃ37¡æ 60 min£¬Ï´µÓ3´Î¡£
4£®¼Óø±ê¿¹Ì壨¶þ¿¹£©ÓÚÿ¿×¼Óø±ê¿¹Ìå¸÷100 ¦ÌL£¬ÖÃ37¡æ 60min£¬Ï´µÓ3 ´Î¡£
5£®¼ÓÁÙʱÅäÖƵĵ×ÎïÒº¸÷100 ¦ÌL£¬Öðµ´¦15·ÖÖÓ¡£¼Ó2M ÁòËá50¦ÌL ÖÕÖ¹·´Ó¦¡£
5£®½á¹ûÅжϣº£¨ÈâÑÛÅжϣ©
ÈôÑÕÉ«ÓÚÒõÐÔ¶ÔÕÕÏàͬÔòΪÒõÐÔ£¬Èô½ÏÒõÐÔ¶ÔÕÕÉîÔòΪÑôÐÔ£¬¸ù¾ÝÑÕÉ«ÉîdzÒÔ£¨+£©±íʾ¡£
×¢ÒâÊÂÏî
1¡¢ÊµÑéʱ£¬Ó¦·Ö±ðÒÔÑôÐÔÓëÒõÐÔ¶ÔÕÕ¿ØÖÆʵÑéÌõ¼þ£¬´ý¼ìÑùƷӦһʽÁ½·Ý£¬ÒÔ±£Ö¤ÊµÑé½á¹ûµÄ׼ȷÐÔ£¬ÓÐʱ±¾µ×¸ß£¬ËµÃ÷ÓзÇÌØÒìÐÔ·´Ó¦£¬¿É²ÉÓÃÑòѪÇå¡¢ÍÃѪÇå»òBSAµÈ·â±Õ¡£
2¡¢ÔÚELISAÖУ¬½øÐи÷ÏîʵÑéÌõ¼þµÄÑ¡Ôñ·Ç³£ÖØÒª£¬È磺¹ÌÏàÔØÌåµÄÑ¡Ôñ£ººÜ¶àÎïÖÊ¿É×÷¹ÌÏàÔØÌ壬Èç¾ÛÂÈÒÒÏ¡¡¢¾Û±½ÒÒÏ©¡¢¾Û±ûõ£°·¡¢ÏËάËصȣ¬¿ÉÒÔÊÇ°¼Æ½°å¡¢ÊԹܡ¢ÖéÁ£µÈ¡£Ä¿Ç°³£ÓõÄ96 ¿×°åΪ¾Û±½ÒÒÏ©°¼¿×°å¡£²»¹ÜºÎÖÖÔØÌ壬ʹÓÃÇ°¾ù½øÐÐɸѡ£¬ÓõÈÁ¿µÄ¿¹Ô°ü±»£¬Í¬ÑùÌõ¼þϱȽϲ»Í¬ÔØÌåµÄ¾ùÒ»ÐÔºÍÎü¸½ÐÔÄÜ¡£
°ü±»¿¹Ì壨»ò¿¹Ô£©µÄÑ¡Ôñ£º ½«¿¹Ì壨»ò¿¹Ô£©Îü¸½ÔÚ¹ÌÏàÔØÌå±íÃæʱ£¬ÒªÇ󴿶Ⱥã¬pH ÖµÊʵ±£¬Îü¸½Ê±¼äºÍµ°°×Á¿Ò²ÓÐÒ»¶¨µÄÓ°Ïì¡£×îºÃͨ¹ýµÎ¶¨È·¶¨µ°°×°ü±»µÄ×î¼ÑŨ¶È¡£
øµÄµ×ÎïºÍ¹²ÇâÌåµÄÑ¡Ôñ£º¹²ÇâÌåÒªÇóÁ®¼Û¡¢°²È«¡¢ÓÐÃ÷ÏÔµÄÏÔÉ«·´Ó¦£¬¶ø±¾ÉíÎÞÉ«¡£ÈçOPD ÓÐDZÔÚµÄÖ°©ÐÔ£¬Ó¦×¢Òâ·À»¤¡£TMB ºÍASTS ÊÇÄ¿Ç°½ÏÂúÒâµÄ¹²ÇâÌå¡£µ×Îï×÷ÓÃÒ»¶Îʱ¼äºó£¬Ó¦¼ÓÈëÇ¿Ëá»òÇ¿¼îÒÔÖÕÖ¹·´Ó¦¡£Í¨³£µØλ×÷ÓÃʱ¼äΪ10¡«30 minΪÒË¡£µ×ÎïʹÓÃÒºÓ¦¸ÃÐÂÏÊÅäÖÆ¡£ ·µ»ØСľ³æ²é¿´¸ü¶à
·ÖÏí¡£¡£¡£
лл·ÖÏí¡¢¡¢¡¢
ÓÐÓã¬ÒÔºó¶à¶àÇë½Ì
ÄãÕâÀï˵µÄµ×ÎïҺΪһÖÖ»º³åÒº£¬ÎÒ¿´¹ýÆäËûÈËÓõĵ×ÎïÓÐÁ½ÖÖ×éºÏÔÚÒ»Æð£¬ÊÇ·ÅÔÚÁ½¸öСƿÀ¼ÓµÄʱºòÏȼÓÒ»ÖÖ£¬ÔÙ¼ÓÁíÒ»ÖÖ£¬¶øÇÒÓмÓÑù˳Ðò¡£ÎÒÒ²²»ÖªµÀÕâÁ½ÖÖÊÇʲô³É·Ö£¬²»ÖªµÀºÍÄã˵µÄÕâ¸öÊÇ·ñÏàÍ£¬