求助SDS-PAGE电泳条带跑不开是为什么?
原料跑的是大米蛋白,用的12%的分离胶,5%浓缩胶。试剂、缓冲液都是新配置的,tris-HCl的pH值也检查过,没有问题。电压用的是恒流30mA,160V。做了几遍条带都跑不开,连mark的条带都没跑很开,不知道什么原因,个人怀疑是胶的问题,但之前也是按照这个配方,没有出现过这种问题。请教各位有经验的大神!
图片最右边是mark
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原料跑的是大米蛋白,用的12%的分离胶,5%浓缩胶。试剂、缓冲液都是新配置的,tris-HCl的pH值也检查过,没有问题。电压用的是恒流30mA,160V。做了几遍条带都跑不开,连mark的条带都没跑很开,不知道什么原因,个人怀疑是胶的问题,但之前也是按照这个配方,没有出现过这种问题。请教各位有经验的大神!
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分离胶的浓度太大了吧?换10%或8%的试试。
胶的浓度应该看你的蛋白大小来定,配胶溶液的PH值也会影响结果的,还有就是你缓冲液是反复用的吗?反复用也跑不开
这就费劲了,因为感觉要不叫胶浓度太大,要不就是电泳缓冲液有问题
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mark也没有跑开,肯定胶浓度太大了