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【求助】酶标仪测的吸光度如何反应存活细胞数目

作者 落雪含香
来源: 小木虫 300 6 举报帖子
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体外药物对细胞毒性试验中,看文献中经常会用到MTT法,并用酶标仪来测吸光度,吸光值可以间接反应活细胞数目,请问大家:
首先,为什么要用酶标仪而不用紫外分光光度计?
其次,用酶标仪测出的吸光值如何反应活细胞数目呢?

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  • 精华评论
  • 落雪含香

    我这个帖子是不是该转移版块啊,无人搭理呢

  • randomqd

    细胞代谢使MTT的成分变色,即吸光度发生变化
    也就是说活细胞越多,代谢越旺盛,吸光度变化越大。。。
    做好对照。
    现在用CCK-8似乎比MTT效果要好,要稳定。

  • 三磷酸腺苷

    酶标仪一次过测96孔……单道的分光光度计太慢了
    而且,测MTT是用可见光波长,不需要紫外

    数量问题你可以做个标准曲线,不同细胞不一样

  • chenyanzhen

    我也想知道用酶标仪和分光光度计有什么不同

  • yyy0305

    先介绍两个概念
    1.MTT测细胞活力的原理。MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT,同时在细胞色素C的作用下,生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazan),甲臜的多少可以用酶标仪在570nm 处进行测定。在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正比,因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶,因此加入MTT 不会有反应。
    2.什么是吸光值?假如仪器给出一个光强为A的特定波长的光,透过检测液体后,侦测到的该特定波长的光的强度为B,吸光值OD=log(A/B),吸光值为0,A=B代表检测液体无吸收;吸光值为1,代表A/B=10,仪器给出的光有90%被检测液吸收。读OD的实验的灵敏度一般都不太好,OD值最大也就3,也就是10的3次方的灵敏度,不如 fluorescence(10七次方)灵敏。

    也就是说,活细胞数目越多,MTT的转换产物甲臜生成的越多,仪器发出的570nm的波长光被溶液吸收的越多,即OD=log(A/B),光透过溶液后侦测到光强越小,B值越小,OD值越大。酶标仪检测时好像还需要读490nm的波长以消除背景值OD=OD570-OD490。这个方法的灵敏度不够,只能相对,定性的测细胞的多或者少,无法定量计算细胞个数。

    无论是分光光度计还是酶标仪,工作原理都是一样的,都可以进行检测的,但是酶标仪更加方便和快捷,适用于96孔板等微孔板的快速读数,

  • 小霜霜呀

    谢谢 解决了我的燃眉之急 哈哈哈

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