对于一个大肠杆菌中的质粒，哪些元件是必须的？
我想用pet28a为基础构建一个新的质粒。
看了一下公司给出的图谱，发现上面主要就有5个元件：col E1 pBR322 origin; Kanr; F1 origin; 多克隆微点；lac I。
我觉得我构建的新质粒只要有前两个元件就可以复制和筛选了，因为另外3个元件不是必需的。
但另一方面如果pet28 复制所需要的酶是他自身编码的话。我的新质粒只有origin 没有相应的酶也复制不了。
所以如果我只是把pet的col E1 pBR322 origin和Kanr扩增出来然后和我其他的片段相连，构建成一个新质粒。这样可不可行？
请大家讨论一下。
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pET28a是表达型载体，如果把启动子及前核糖体结合位点去掉，肯定没法表达
对于一个质粒，理论最少只需要origin就可以了
但为了克隆的需要 加个抗性基因也是必要的
所以我认为楼主的想法应该是可以的
但是记得保留kanR的启动子和SD序列 否则都无法表达KANR 就不能筛选了
还有不知道大肠杆菌内质粒复制的时候是否需要复制的相关蛋白？
我用过其他宿主菌的质粒,有些质粒除了origin起始位点外，
还需要某些复制蛋白才能在宿主菌内复制，你最好再仔细检查下PET28的序列！
当然，简化的质粒当然会失去原来的一些功能。具体设计你还得好好考虑
[ Last edited by houjinglhy on 2009-8-29 at 21:00 ]，
我不是用它来做表达；所以只要求它能在宿主中维持就行，也就是说能复制和筛选。