【求助】乙腈的紫外吸收波长问题
我做HPLC用的是水和乙腈,比例是95:5,设定波长是196nm。出现了好多问题,首先作了一下乙腈的吸收,发现吸收很大;另外一个是每次做的谱图都不一样,差别大;基线噪音大;有的峰特别宽。到底是怎么回事?
用的是紫外检测器。
请大家帮帮我啊。
[ Last edited by chiraler on 2009-6-23 at 20:43 ] 返回小木虫查看更多
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我做HPLC用的是水和乙腈,比例是95:5,设定波长是196nm。出现了好多问题,首先作了一下乙腈的吸收,发现吸收很大;另外一个是每次做的谱图都不一样,差别大;基线噪音大;有的峰特别宽。到底是怎么回事?
用的是紫外检测器。
请大家帮帮我啊。
[ Last edited by chiraler on 2009-6-23 at 20:43 ] 返回小木虫查看更多
乙腈在196的吸收很大的啊
噪音大很正常,一般都是选择大于220的波长
甲醇和乙腈作流动相时,一般波长到应该大于220nm的
5%的乙腈很难平衡,最好先用大比例的乙腈先冲一会,
以前一个项目,用到50%的 乙腈,210nm
很好平衡,都很好!乙腈190nm处末端吸收比较大
[ Last edited by zijing_988 on 2009-6-24 at 07:20 ]
乙腈在196nm还可以勉强使用的,它的截止波长大约在190nm,甲醇的高点,202nm
少比例的有机溶剂会难平衡点,基线难免有波动,特别是保留时间,没有平衡好会变化很大
尽量多平衡
峰宽有很多原因的,主要是流动相的原因。不知道保留时间 ,流速,是多少。和可以传几张图来。那样更便于分析
,
谢谢大家。
流速是1mL/min
可是图怎么传啊
乙腈的紫外吸收在210nm,楼主检测时的吸收波长不应低于这个数值。HPLC用的是水和乙腈,比例是95:5,有机相的比例较低的话导致柱子平衡效果不好,基线不稳,如果在做液相时采用的是二元泵,可以改用一元泵试试,配置5%的乙腈的水溶液单泵洗脱效果可能好些,同时在进样前一定要将柱子平衡好。
我看你紫外设定的波长不好!