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寻找感受态制备的好方法

作者 qfish311: 来源: 小木虫 500 10 举报帖子

最近我们实验室的感受态细胞一直都做的不好，最可怕的就是现做现用还可以
，但是一放到-70度冰箱再拿出来使用就不行了，连原质粒转化都不长斑。不知道到底是什么原因，我们用了氯化钙法。和网上找的一种TSB法，都是一样，而且用TSB法的DH5a菌落长的特别的小。
哪位大虾能有好的，实验室已经用了很久的感受态制备protocol能教我一下吗？谢谢啊！
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精华评论

larainestar

推荐一下SSCS的试剂盒。只需要在培养菌到相应的OD后离心去除上清，用该液体重悬菌泥，分装，液氮速冻即可。
并非广告啊。
我们在用，生工买的，效率颇高。
skkyy88888

-70保存最好加点抗冻剂，比如DMSO，在增强转化效率方面可以加少许K-MES。制好的感受态最好液氮放置10钟以上在转移到-70，效果很好，可与市面上出售的感受态像媲美。
amilie030312

我觉得做感受态的时候最重要的一个是保持低温，尤其是离心的时候用冷冻离心机，一个是绝对的不能污染，我一直用LB培养基CaCl2在做的，效果都不错，如果效果不是很好建议培养基用SOC的，效果会好些，