SOD检测试剂盒！(A001)


发布日期:2006-03-20




一：产品简介：

1 、测定意义：超氧化物歧化酶（ SOD ）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（ O 2 － · ）保护细胞免受损伤。

2、测定原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（ O 2 － · ） , 后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含 SOD 时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的 SOD 活力。高等动物细胞内只有二种 SOD 即铜锌 - SOD （ Cu Zn -SOD ）与锰 - SOD(Mn-SOD), 二者相加等于总 SOD(T-SOD) 。采用我所研制的抽提法处理后的样本， Mn-SOD 活力丧失，而 CuZn-SOD 活力不变，再用 T-SOD 活力减去 CuZn-SOD 活力，即为 Mn-SOD 活力。

3、 简便快速：整个操作过程约 50 分钟，在这期间可测 100 例以上样本。这种短时间测定大批量样本的测试方法，很受广大科研人员的欢迎。

4、 取样量极微：本法取手指或耳垂等末梢血 20 μl ～ 50 μl 即可测红细胞中的 SOD ，只需 2ml 静脉血可测白细胞中的 SOD 及血小板中 SOD ，只需 6mg 组织就可测组织匀浆、胞浆、 0.2g 组织可测线粒体及微粒体中的 SOD 。

5、灵敏度高： ID50=0.05g/ml 是邻苯三酚法灵敏度的 18 倍，因而可测定实验用动物的心肌灌流液、脑脊液、胸腹水、肾透析液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞中的 SOD ，此法最灵敏。

6、稳定性好：试剂放在 0°C ～ 4°C 冰箱中可保存 6 个月。

7、再现性好：变异系数 CV=1.7% ，同一份标本这次测得结果与几天后测得结果相差无几。

8、回收试验： X + SD=103.3 + 2.63%

9、测试面广：即可测 T-SOD 又可测 Mn-SOD 也可测 CuZn-SOD ，本法测试过实验动物的红细胞、白细胞、血小板、血清（浆）、心肌组织、肺、肝、肾、脾、耳膜、肾上腺等几十种组织匀浆、线粒体、微粒体、离体心肌灌流液、肾透析液、腹水、胸水、脑脊液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞等，效果均很佳。

10、方法更先进、技术更成熟：我所在已研制出 SDS+KCl 抑制法测 CuZn － SOD 和 KCN 抑制 CuZn － SOD 法测定 Mn － SOD 的基础上，开发出抽提法测定 CuZn － SOD ，该法不仅无毒无味，而且较 SDS+KCl 抑制法测 CuZn － SOD 更简便 、 更快捷。通过抽提法测定 CuZn － SOD ，同时测定 T － SOD ，即可计算出 Mn － SOD 活力。

11、质优价廉：本试剂盒主要原料为美国进口，但价格与国内邻苯三酚测定法相近。

12、实验仪器简单：所用的 37 ℃恒温水浴锅 、 550nm 处的分光光度计、低速台式离心机、微量移液器等主要实验设备均为实验室常用设备，无需特殊设备。用简单的实验设备测定出高水平的指标。

13 、适用范围广：本试剂盒不仅可以在普通分光光度计上操作，还可以在半自动、全自动生化分析仪、酶标仪上等先进仪器上操作。

14 、说明书简洁、详细，易读易懂，试剂配制简单，实验操作简便易行，操作人员无需专门培训，只需按照说明书要求操作，即可获得理想的实验结果。

15 、此方法经江苏省卫生厅组织的同行专家鉴定，并获卫生厅科技成果一等奖。此专利已由中国、美国、英国等国家专利刊收集。文章发表于南京铁道医学院学报 1991 年 3 月第十卷第一期 27 — 30 页，作者：季建平。


二 、 试剂盒组成：
试剂名称 包装 100T 50T

试剂一： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5

试剂二： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5

试剂三： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5

试剂四： 液体 350 m l × 2 液体 350 m l × 1

试剂四： 稀释液 5ml × 2 稀释液 5ml × 1

试剂五： 粉剂×1 粉剂×1

试剂六： 粉剂×1 粉剂×1

三 、 反应参数：

反应温度 37 ℃
反应时间 40 分钟
测定波长 550nm
比色光径 1cm 光径玻璃比色皿
四 、 保存条件：
在 4 ℃的保存条件下，可以稳定 6 个月（注意：试剂四不可以冷冻）

我好象回复过你这个帖子了吧，

谢谢！您提供的的资料我已了解，我想需要的是操作流程，即试剂盒的说明书，而不是您所提供的，但我还是要谢谢您！

[交流求助]

你可以参照一下
http://www.beyotime.com/s0060.htm
使用说明：

1. 超氧化物检测工作液的配制：

  按照下表比例配制超氧化物检测工作液：

   1个检测  5个检测  10个检测  20个检测  50个检测  
超氧化物检测缓冲液  200微升  1毫升  2毫升  4毫升  10毫升  
WST-1溶液  10微升  50微升  100微升  200微升  500微升  
Catalase溶液  2微升  10微升  20微升  40微升  100微升  
超氧化物检测工作液  212微升  1.06毫升  2.12毫升  4.24毫升  10.6毫升  

2. 悬浮细胞产生超氧化物的检测：

  a. 细胞用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。  
  b. 约按5-10万个细胞/毫升的比例，用超氧化物检测工作液悬浮细胞。

  c. 在96孔板中，每孔加入200微升用超氧化物检测工作液悬浮的细胞，每孔约1-2万个细胞。

  d. 37℃孵育3分钟。

  e. 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物，如PMA等，刺激10-60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不

    加刺激物的孔作为空白对照。选择1-2个加刺激物的孔中加入2微升SOD以验证整个检测体系，加SOD溶液的检测可以不做。试
    剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表：  
     细胞  超氧化物检测工作液  刺激物  SOD溶液  
空白对照  ＋  ＋  －  －  
待测样品  ＋  ＋  ＋  －  
阴性对照  ＋  ＋  ＋  ＋  

  f. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波
    长测定。
3. 贴壁细胞产生超氧化物的检测：

  a. 约按每孔5000-10000个细胞(具体的细胞接种数量须根据细胞的大小和生长速度自行确定)把细胞培养到96孔板中，使第二天

    或待检测时细胞为80-90%满。  
  b. 吸去培养液，用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。

  c. 每孔加入200微升超氧化物检测工作液，37℃孵育3分钟。

  d. 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物，如PMA等，刺激10-60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不
    加刺激物的孔作为空白对照。选择1-2个加刺激物的孔中加入2微升SOD以验证整个检测体系，加SOD溶液的检测可以不做。试
    剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表：  
     细胞  超氧化物检测工作液 刺激物  SOD溶液
空白对照 ＋  ＋  － －
待测样品  ＋  ＋  ＋  －
阴性对照 ＋  ＋  ＋  ＋  

  e. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波
    长测定。