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风铃永不孤单银虫 (小有名气)
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在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？ 已有1人参与
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在下小硕一枚，前天下午开始对样品做PCR扩增，有20个样品，应该算是全部扩出来了，就是有个别亮度较弱，所以我想第二天把那几个弱的重新扩增一下。 然后问他来了，那几个若得还是没有扩增出来，还是比较弱（我确实认真操作，很认真！！！），然后我还担心是我操作问题，我就接着又做了一次，因为只有3个样品，比较快，做完之后，发现还是没有扩增出来，我就无语了~~~ 后来，怀疑是不是稀释的20倍的DNA模板浓度低呢？我就分别用未稀释的DNA模板1ul，稀释20倍的DNA模板1ul、稀释20倍DNA扩增后的样品1ul、同时扩增，这下倒是扩增出来了，但是有的亮有的不亮，我都晕了，我把图附上，大家有能看出问题的，请批评指正。谢谢哈  1.jpg  2.jpg |
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5楼2015-11-20 13:50:22
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6楼2015-11-20 14:14:12
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扩增不出来或者弱，说明条件没有摸索到最适条件，你的图上显示拖尾现象存在，但是影响不大，正常的，亮的根据对比有的少，可能是不同模板的浓度没有掌握好（在引物酶用量相同的情况下） 然后，marker没有充分的跑开，胶浓度也有点问题，一般的模板大小和胶浓度有对应关系，可以看资料上有：提高PCR特异性方法总结，用酶的话热启动酶高保真聚合酶都可以（模板小于10kb） |
7楼2015-11-23 16:59:08
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8楼2015-11-23 22:18:15