应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？
51/1返回列表
查看: 1870  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

风铃永不孤单

银虫 (小有名气)

[求助] 在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？ 已有1人参与

在下小硕一枚，前天下午开始对样品做PCR扩增，有20个样品，应该算是全部扩出来了，就是有个别亮度较弱，所以我想第二天把那几个弱的重新扩增一下。
然后问他来了，那几个若得还是没有扩增出来，还是比较弱（我确实认真操作，很认真！！！），然后我还担心是我操作问题，我就接着又做了一次，因为只有3个样品，比较快，做完之后，发现还是没有扩增出来，我就无语了~~~
后来，怀疑是不是稀释的20倍的DNA模板浓度低呢？我就分别用未稀释的DNA模板1ul，稀释20倍的DNA模板1ul、稀释20倍DNA扩增后的样品1ul、同时扩增，这下倒是扩增出来了，但是有的亮有的不亮，我都晕了，我把图附上，大家有能看出问题的，请批评指正。谢谢哈

在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？
1.jpg


在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？-1
2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-11-20 09:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
扩增不出来或者弱，说明条件没有摸索到最适条件，你的图上显示拖尾现象存在，但是影响不大，正常的，亮的根据对比有的少，可能是不同模板的浓度没有掌握好（在引物酶用量相同的情况下）
然后，marker没有充分的跑开，胶浓度也有点问题，一般的模板大小和胶浓度有对应关系，可以看资料上有：提高PCR特异性方法总结，用酶的话热启动酶高保真聚合酶都可以（模板小于10kb）
赞一下 回复此楼
7楼2015-11-23 16:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能告诉我你引物是否一样、模板是什么吗？模板有质检过吗？还有就是你这胶图实在是不忍直视
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-20 11:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风铃永不孤单

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-11-20 11:01:29
能告诉我你引物是否一样、模板是什么吗？模板有质检过吗？还有就是你这胶图实在是不忍直视

用的是同一种引物，所以DNA模板是用试剂盒提取的，作为原始DNA模板，一般都是吸取1ul稀释20倍后，作为pcr模板的~~~~这个胶图不就是PCR扩增后的图吗？不都是这样的吗？
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-20 11:23:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hcf321283

木虫 (小有名气)
dna测下浓度，25ng足够作模板了！最好跑个电泳看下dna质量！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-20 12:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭