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chengcheng8901新虫 (初入文坛)
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[交流]
关于细菌RT-PCR的一些问题，希望同行探讨一下 已有1人参与
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最近在做白叶枯病原菌目的基因的RT-PCR，有些难题希望和各位探讨！ 我用的是天根的试剂盒提取的菌液的总RNA，效果还好，点两微升胶图很清晰，有明亮的三条带，虽然最小的那一条有些模糊。 但是提取的总RNA可能会有DNA污染，因此并需检测和纯化。以后面临了很多问题。 1、我采用什么方法去检测有没有DNA污染？（因为当时考虑的原核生物里没有内含子，因为我想采取用目的基因的引物去扩我 提取的总RNA，我认为的是如何能扩出来目的片段则有DNA污染，因为我用的酶是普通的taq酶。不知道这种方法是否合适？） 2、有没有纯化效率高的方法？（我采用的是DNase I 消化，然后再抽提的方法，这里我有个问题是我能不能省去抽提的步骤，直接消化完后进行检测，再反转录） 3、由于在选择actin的时候考虑的真核和原核生物的看家基因不同，所以只能选择16srRNA作为control。 4、选择引物的时候？（一般真核生物都是选择oligdT，但是原核生物怎么办？用随机引物吗？） |
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phyllislhy
木虫 (正式写手)
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2楼2011-05-15 18:12:31