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风铃永不孤单

银虫 (小有名气)

[求助] 在做PCR的时候,扩增不出来,或者特别弱该怎么办??? 已有1人参与

在下小硕一枚,前天下午开始对样品做PCR扩增,有20个样品,应该算是全部扩出来了,就是有个别亮度较弱,所以我想第二天把那几个弱的重新扩增一下。
然后问他来了,那几个若得还是没有扩增出来,还是比较弱(我确实认真操作,很认真!!!),然后我还担心是我操作问题,我就接着又做了一次,因为只有3个样品,比较快,做完之后,发现还是没有扩增出来,我就无语了~~~
后来,怀疑是不是稀释的20倍的DNA模板浓度低呢?我就分别用未稀释的DNA模板1ul,稀释20倍的DNA模板1ul、稀释20倍DNA扩增后的样品1ul、同时扩增,这下倒是扩增出来了,但是有的亮有的不亮,我都晕了,我把图附上,大家有能看出问题的,请批评指正。谢谢哈

在做PCR的时候,扩增不出来,或者特别弱该怎么办???
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在做PCR的时候,扩增不出来,或者特别弱该怎么办???-1
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风铃永不孤单

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by MarchZR at 2015-11-23 16:59:08
扩增不出来或者弱,说明条件没有摸索到最适条件,你的图上显示拖尾现象存在,但是影响不大,正常的,亮的根据对比有的少,可能是不同模板的浓度没有掌握好(在引物酶用量相同的情况下)
然后,marker没有充分的跑开 ...

好的谢谢大哥!!!
8楼2015-11-23 22:18:15
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查看全部 8 个回答

hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能告诉我你引物是否一样、模板是什么吗?模板有质检过吗?还有就是你这胶图实在是不忍直视
2楼2015-11-20 11:01:29
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风铃永不孤单

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-11-20 11:01:29
能告诉我你引物是否一样、模板是什么吗?模板有质检过吗?还有就是你这胶图实在是不忍直视

用的是同一种引物,所以DNA模板是用试剂盒提取的,作为原始DNA模板,一般都是吸取1ul稀释20倍后,作为pcr模板的~~~~这个胶图不就是PCR扩增后的图吗?不都是这样的吗?
3楼2015-11-20 11:23:29
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hcf321283

木虫 (小有名气)

dna测下浓度,25ng足够作模板了!最好跑个电泳看下dna质量!

发自小木虫IOS客户端
4楼2015-11-20 12:56:24
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