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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？
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风铃永不孤单

银虫 (小有名气)

[求助] 在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？ 已有1人参与

在下小硕一枚，前天下午开始对样品做PCR扩增，有20个样品，应该算是全部扩出来了，就是有个别亮度较弱，所以我想第二天把那几个弱的重新扩增一下。
然后问他来了，那几个若得还是没有扩增出来，还是比较弱（我确实认真操作，很认真！！！），然后我还担心是我操作问题，我就接着又做了一次，因为只有3个样品，比较快，做完之后，发现还是没有扩增出来，我就无语了~~~
后来，怀疑是不是稀释的20倍的DNA模板浓度低呢？我就分别用未稀释的DNA模板1ul，稀释20倍的DNA模板1ul、稀释20倍DNA扩增后的样品1ul、同时扩增，这下倒是扩增出来了，但是有的亮有的不亮，我都晕了，我把图附上，大家有能看出问题的，请批评指正。谢谢哈

在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？
1.jpg


在做PCR的时候，扩增不出来，或者特别弱该怎么办？？？-1
2.jpg
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1楼 2015-11-20 09:51:50
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风铃永不孤单

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-11-20 12:56:24
dna测下浓度，25ng足够作模板了！最好跑个电泳看下dna质量！

先PCR，然后做琼脂糖电泳看看是否扩增出来，然后才跑DGGE电泳~
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5楼2015-11-20 13:50:22
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hcf321283

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能告诉我你引物是否一样、模板是什么吗？模板有质检过吗？还有就是你这胶图实在是不忍直视
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2楼2015-11-20 11:01:29
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风铃永不孤单

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hcf321283 at 2015-11-20 11:01:29
能告诉我你引物是否一样、模板是什么吗？模板有质检过吗？还有就是你这胶图实在是不忍直视

用的是同一种引物，所以DNA模板是用试剂盒提取的，作为原始DNA模板，一般都是吸取1ul稀释20倍后，作为pcr模板的~~~~这个胶图不就是PCR扩增后的图吗？不都是这样的吗？
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3楼2015-11-20 11:23:29
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hcf321283

木虫 (小有名气)
dna测下浓度，25ng足够作模板了！最好跑个电泳看下dna质量！

发自小木虫IOS客户端
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4楼2015-11-20 12:56:24
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