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18273176704

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr有带,总是不亮,,,什么原因?? 已有7人参与

做得普通pcr
2xEasy  MIX     10ul
   引物1            1ul
  引物2             1ul
   模板DNA        1ul
         水             7ul
20ul  体系       做了温度梯度。。。50.52.54.56.58.       50.52.54.  都有两条带。。56.58   有一条可是太暗。。。
循环是35个
之前也做过。。20ul亮,,,50ul  就不亮。。。再重复20ul   又不一样了。。也是暗。。为什么有带就是不亮。。。请求大神们指教。。。
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铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
18273176704: 金币+3, ★★★很有帮助, 用二次pcr做出来了 2015-11-25 16:35:23
就做20ul体系,取5ul检测,剩下的可以作为模板进行二次PCR,试试看。
6楼2015-11-13 13:07:07
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鱼yao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-12 21:49:32
可能是因为退火温度就是在52度左右,56、58度温度太高,所以条带不亮
人都一样
2楼2015-11-12 21:26:07
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18273176704

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鱼yao at 2015-11-12 21:26:07
可能是因为退火温度就是在52度左右,56、58度温度太高,所以条带不亮

不是温度问题。。同样的温度20ul亮,50ul不亮,后来重做20ul也不亮了。。
铭记那些不可回首。。。相信自己。。。
3楼2015-11-12 21:44:15
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534720018

至尊木虫 (著名写手)

4楼2015-11-12 22:04:25
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