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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR重复不出来
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liulaizhuang

金虫 (正式写手)

[求助] 菌液PCR重复不出来 已有2人参与

之前做转化，挑抗性培养基上的菌落至抗性液体培养基中，摇菌后做菌落PCR，能够P出来目的条带（位于载体上），可是转接菌液至新的抗性液体培养基中，摇菌后再次PCR，未能P出目的条带？请有经验的前辈帮忙分析一下这是什么原因造成的，此外还想请教一下菌液PCR假阳性的原因是什么？
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1楼 2015-10-21 17:09:03
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偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)
是一次偶然情况还是重复发生过好几从这种现象啊？做过筛菌的孩子同知道筛菌的痛苦～帮顶

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2楼2015-10-21 17:44:50
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tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nono2009: 金币-20, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:07:13
本帖内容被屏蔽
3楼2015-10-21 20:47:10
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)
首先假阳性就是把空载体导入了细胞中，所以也会在带有抗性的培养基上生长，但是却不带有目的片段，所以肯定P不出条带。不知道楼主是不是用已经P出目的条带的菌液进行的转接，如果是，那就重新p一次，应该不会有问题；如果不是，那就很正常了，上面说了是假阳性。所以菌落pcr要比菌液pcr成功率高很多，建议楼主以后就用菌落pcr。

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我要让你的生活因为有我而更精彩
4楼2015-10-22 12:12:14
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liulaizhuang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-10-22 12:12:14
首先假阳性就是把空载体导入了细胞中，所以也会在带有抗性的培养基上生长，但是却不带有目的片段，所以肯定P不出条带。不知道楼主是不是用已经P出目的条带的菌液进行的转接，如果是，那就重新p一次，应该不会有问题 ...

这个不会出现空载的情况的，因为我们之前就已经测序验证了（在大肠杆菌），然后是转化另外一种菌里面，做菌液PCR重复不出来，就不清楚原因了。
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5楼2015-10-22 16:21:17
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liulaizhuang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-21 20:47:10
菌落PCR，只是挑了点平板上的菌体，估计杂志带入的比较少；而菌液PCR，不知楼主是怎么做的。如果只是吸一点进行PCR的话，那么培养基会带入很多。那么对于一些不太好的酶，或者缓冲液不太强的，带入的培养基会抑制酶 ...

谢谢 我试试
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6楼2015-10-22 16:21:33
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liulaizhuang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 偶尔哼哼的猪 at 2015-10-21 17:44:50
是一次偶然情况还是重复发生过好几从这种现象啊？做过筛菌的孩子同知道筛菌的痛苦～帮顶

重复几次都是这种现象，不清楚原因，若是假阳性，为何能在抗性培养基里面长的很好（已排除空载情况），菌液PCR却不能P出条带。
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7楼2015-10-22 16:23:00
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大brain

银虫 (小有名气)
不太懂呵。会不会摇菌时温度高，导致质粒丢失

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态度很重要
8楼2015-11-05 23:08:18
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

为什么要菌液PCR，直接板上挑单菌落做PCR不好么
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9楼2015-11-06 08:40:07
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