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liulaizhuang

金虫 (正式写手)

[求助] 菌液PCR重复不出来 已有2人参与

之前做转化,挑抗性培养基上的菌落至抗性液体培养基中,摇菌后做菌落PCR,能够P出来目的条带(位于载体上),可是转接菌液至新的抗性液体培养基中,摇菌后再次PCR,未能P出目的条带?请有经验的前辈帮忙分析一下这是什么原因造成的,此外还想请教一下菌液PCR假阳性的原因是什么?
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

首先假阳性就是把空载体导入了细胞中,所以也会在带有抗性的培养基上生长,但是却不带有目的片段,所以肯定P不出条带。不知道楼主是不是用已经P出目的条带的菌液进行的转接,如果是,那就重新p一次,应该不会有问题;如果不是,那就很正常了,上面说了是假阳性。所以菌落pcr要比菌液pcr成功率高很多,建议楼主以后就用菌落pcr。

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我要让你的生活因为有我而更精彩
4楼2015-10-22 12:12:14
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偶尔哼哼的猪

新虫 (小有名气)

是一次偶然情况还是重复发生过好几从这种现象啊?做过筛菌的孩子同知道筛菌的痛苦~帮顶

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2楼2015-10-21 17:44:50
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tolobio

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nono2009: 金币-20, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:07:13
本帖内容被屏蔽

3楼2015-10-21 20:47:10
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liulaizhuang

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-10-22 12:12:14
首先假阳性就是把空载体导入了细胞中,所以也会在带有抗性的培养基上生长,但是却不带有目的片段,所以肯定P不出条带。不知道楼主是不是用已经P出目的条带的菌液进行的转接,如果是,那就重新p一次,应该不会有问题 ...

这个不会出现空载的情况的,因为我们之前就已经测序验证了(在大肠杆菌),然后是转化另外一种菌里面,做菌液PCR重复不出来,就不清楚原因了。
5楼2015-10-22 16:21:17
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