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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于做转化连接
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RH46795897

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于做转化连接 已有2人参与

想问一下，胶回收产物浓度略低，连T载时该注意什么？

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1楼 2015-10-16 16:27:05
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wxb2061

银虫 (小有名气)
也在做，每次回收都特别差劲！目的片段条带很暗，然后自己就多加。好像有个定量算法，片段与载体比是3:1，根据亮度，片段大小计算，但本人都是稀里糊涂，看着来

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走在途中……
2楼2015-10-16 17:39:01
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RH46795897

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxb2061 at 2015-10-16 17:39:01
也在做，每次回收都特别差劲！目的片段条带很暗，然后自己就多加。好像有个定量算法，片段与载体比是3:1，根据亮度，片段大小计算，但本人都是稀里糊涂，看着来

那你连接之后提质粒送测序，能测出你想要的东西嘛

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3楼2015-10-16 17:56:27
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jianguochen

新虫 (小有名气)
浓度低的话，可以酌情增加回收产物的量嘛，5:1也行。要是实在回收不到合格浓度的产物，那就试试将回收产物浓缩一下呗。
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4楼2015-10-16 18:12:59
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-16 20:19:45
本帖内容被屏蔽
5楼2015-10-16 18:34:49
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wxb2061

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by RH46795897 at 2015-10-16 17:56:27
那你连接之后提质粒送测序，能测出你想要的东西嘛
...

测序结果是正确的

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走在途中……
6楼2015-10-16 23:23:07
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RH46795897

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-16 18:34:49
Promega的T4连接酶用这个体系

谢谢你

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7楼2015-10-17 08:57:05
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RH46795897

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jianguochen at 2015-10-16 18:12:59
浓度低的话，可以酌情增加回收产物的量嘛，5:1也行。要是实在回收不到合格浓度的产物，那就试试将回收产物浓缩一下呗。

谢谢

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8楼2015-10-17 08:57:18
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:09:17
浓度低的话切5管跑胶，binding buffer溶解后过柱子时都过到同一根柱子上，提高浓度
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9楼2015-10-18 16:05:00
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chs4502

金虫 (小有名气)
根据我的经验，回收以后条带比较暗，甚至是看不到条带，做转化也没什么大的问题。顶多就是转化效率低了一些。最近一次就长了两个，测序完全正确。
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10楼2015-10-19 12:27:34
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