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A张盈

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助RNA提取电泳图分析 已有4人参与

有哪位大神帮忙分析下,我是提的放线菌中的RNA,第一个胶孔是2000的maker,总感觉跑出的条带对应的大小不太对,哪位大神帮忙分析下,谢谢
求助RNA提取电泳图分析
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dorecnu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-29 22:34:38
理想的RNA提取条带应该是三条28S,18S,5S亮度上应该依次减弱28S最亮,18S次之,5S最弱。但是在实际试验中我们往往只能获得两条条带,这取决于你后续的实验精度要求,如果是普通的定量PCR的话,我倒是建议你先将这个RNA反转录进行后续的实验,看看结果如何。有的物种RNA提取条带因为复杂的原因不能呈现典型的三条带,但并不影响后续的实验。我就有师姐一直纠结与RNA条带不清晰,但是我们后续进行芯片杂交的时候发现也能满足分析的要求。所以我也建议你先进行后续的实验看看,莫纠结。另外,从电泳图上看,凝胶孔有杂质,是蛋白污染的可能性比较大,所以建议你采取相应的前处理措施。
3楼2015-09-29 17:08:10
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然处

金虫 (小有名气)

rna有些降解,分子大小的话,用marker对比也不太正确,毕竟dna和rna还有有结构上的差别的

发自小木虫Android客户端
迷茫会结束的
2楼2015-09-29 16:58:58
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liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
3楼说的比较好,你提的RNA降解的比较厉害,可以先试着做后续的实验,我之前提的也有降解的,有的也是可以用的,如果没有结果,重新提取RNA过程中在4度离心时速度要大一点,我们一般是12000转,这样会减少杂质的残留污染,另外提RNA尽量速度快一点,减少空气流动就好,外部装备像穿实验服戴口罩这些影响没那么严重,少说话就行,戴口罩比较好,RNA跑之前在70℃进行10min变性,电压80v跑电泳3min感觉不行吧,三个条带根本跑不开,40min可以的,你可以在20分钟左右拿出来看一下条带怎么样,你1%的胶就可以了,没必要加大浓度
好好学习,天天向上
11楼2015-09-30 17:12:09
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普通回帖

DanceMacabre

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-29 22:34:58
胶的浓度,配1.5的胶。电泳时间,3min。RNA提取过程,在冰上低温;加乙醇洗涤后,加水溶解时,在超净台搞。做实验时,穿实验服,戴口罩。结果包你满意。

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-29 17:55:46
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A张盈

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 然处 at 2015-09-29 16:58:58
rna有些降解,分子大小的话,用marker对比也不太正确,毕竟dna和rna还有有结构上的差别的

应该是大部分是降解了,我用的DNA  2000的maker
5楼2015-09-29 19:08:15
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A张盈

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dorecnu at 2015-09-29 17:08:10
理想的RNA提取条带应该是三条28S,18S,5S亮度上应该依次减弱28S最亮,18S次之,5S最弱。但是在实际试验中我们往往只能获得两条条带,这取决于你后续的实验精度要求,如果是普通的定量PCR的话,我倒是建议你先将这个R ...

好的,谢谢您
6楼2015-09-29 19:09:13
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A张盈

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by DanceMacabre at 2015-09-29 17:55:46
胶的浓度,配1.5的胶。电泳时间,3min。RNA提取过程,在冰上低温;加乙醇洗涤后,加水溶解时,在超净台搞。做实验时,穿实验服,戴口罩。结果包你满意。

胶的浓度用的1%的胶,电泳时用的80V,将近40min
7楼2015-09-29 19:12:32
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DanceMacabre

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by A张盈 at 2015-09-29 19:12:32
胶的浓度用的1%的胶,电泳时用的80V,将近40min...

你那样肯定跑不出漂亮图,你按我的条件来搞,看看

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8楼2015-09-29 19:24:09
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DanceMacabre

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by A张盈 at 2015-09-29 19:12:32
胶的浓度用的1%的胶,电泳时用的80V,将近40min...

电泳条件就用你实验室常规跑质粒的条件,一般是跑1地暖yig0-15min对应的那个电压电流。跑RNA时只跑3-5min。切记。跑久了,

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9楼2015-09-29 19:29:53
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A张盈

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by DanceMacabre at 2015-09-29 19:29:53
电泳条件就用你实验室常规跑质粒的条件,一般是跑1地暖yig0-15min对应的那个电压电流。跑RNA时只跑3-5min。切记。跑久了,
...

好的  我试试看   特别感谢
10楼2015-09-29 21:06:51
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