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小小树虫

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：帮忙看下RNA提取跑胶图

小虫第一次提RNA，电泳跑胶结果如下：

M=15000，只有2-3，5泳道能看到点东西。电泳条件为150V,18min。小电泳槽（大概10cm长的那种）跑的

这张图为师兄提的RNA，我们同时提的。样品偶数泳道不亮的为我磨的样 罪过了。电泳条件一样，只是时间为10min。

这张为逆转录的cDNA电泳图，序号与上面第一张我提的RNA跑胶图同序。
还有就是为什么我们的胶图上DNA跑到的地方（上半截）是灰白的，而下面干净点。这是怎么回事呢？记得以前胶片上没见过这种状况

[ Last edited by 小小树虫 on 2012-8-22 at 19:37 ]
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1楼 2012-08-22 19:30:22
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lenxiangyue

木虫 (正式写手)

金木水火土

【答案】应助回帖

我觉得你磨得RNA 已经降解了吧  你的mark是15000的？太大了吧  一般跑RNA 的mark 我都是选用小mark  同时在跑过后立马拍照 太容易降解了 RNA没提取好 逆转录不可能转的好啊  目的片段是多大的啊？就在这区域找 找不到就是没提取成功
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加油
2楼2012-08-23 14:19:59
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小小树虫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lenxiangyue at 2012-08-23 14:19:59
我觉得你磨得RNA 已经降解了吧  你的mark是15000的？太大了吧  一般跑RNA 的mark 我都是选用小mark  同时在跑过后立马拍照 太容易降解了 RNA没提取好 逆转录不可能转的好啊  目的片段是多大的啊？就在这区域找 找不 ...

谢谢回复！！
我提出来之后用分光光度计测浓度1-8号样有400ng/ul，A260/A280大概在2.1左右，试剂盒说明书上给的正常范围是1.8-2.0。应该降解不是很严重吧？但是跑胶又成这样了
9、10号降解比较严重，都3.多了。样品浓度也都在10ng/ul以下。

逆转录我用的随机引物和oligo（dT），这个有目的片段麽？我以前没做过这个不知道。
求赐教
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3楼2012-08-23 14:56:49
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主是把EB加到胶里的吧？
此外，你们的RNA似乎降解严重哦尤其第一张图。。。。。
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4楼2012-08-26 11:30:03
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小小树虫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-26 11:30:03
楼主是把EB加到胶里的吧？
此外，你们的RNA似乎降解严重哦尤其第一张图。。。。。

嗯 加胶里不好吗？我以前喜欢一个一个加，跑RNA怕点样慢就加胶里了
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5楼2012-08-26 13:22:59
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

不是不好，但是会经常出现你说的这种情况，即胶一半黑一半白。因为EB带正电荷，因此电泳时它也在迁移而造成胶的上下黑白不同。
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6楼2012-08-26 19:14:54
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

降解太严重了。加过RNase吗，跑电泳时间不要太长，20min足够了0.7%的胶
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7楼2012-11-06 04:42:40
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