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A张盈

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 求助RNA提取电泳图分析已有4人参与

有哪位大神帮忙分析下，我是提的放线菌中的RNA，第一个胶孔是2000的maker，总感觉跑出的条带对应的大小不太对，哪位大神帮忙分析下，谢谢

IMG_20150929_112015.jpg

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1楼 2015-09-29 14:07:08

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liping121200

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

3楼说的比较好，你提的RNA降解的比较厉害，可以先试着做后续的实验，我之前提的也有降解的，有的也是可以用的，如果没有结果，重新提取RNA过程中在4度离心时速度要大一点，我们一般是12000转，这样会减少杂质的残留污染，另外提RNA尽量速度快一点，减少空气流动就好，外部装备像穿实验服戴口罩这些影响没那么严重，少说话就行，戴口罩比较好，RNA跑之前在70℃进行10min变性，电压80v跑电泳3min感觉不行吧，三个条带根本跑不开，40min可以的，你可以在20分钟左右拿出来看一下条带怎么样，你1%的胶就可以了，没必要加大浓度

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好好学习，天天向上

11楼2015-09-30 17:12:09

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然处

金虫 (小有名气)

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rna有些降解，分子大小的话，用marker对比也不太正确，毕竟dna和rna还有有结构上的差别的

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迷茫会结束的

2楼2015-09-29 16:58:58

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dorecnu

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-29 22:34:38

理想的RNA提取条带应该是三条28S,18S,5S亮度上应该依次减弱28S最亮，18S次之，5S最弱。但是在实际试验中我们往往只能获得两条条带，这取决于你后续的实验精度要求，如果是普通的定量PCR的话，我倒是建议你先将这个RNA反转录进行后续的实验，看看结果如何。有的物种RNA提取条带因为复杂的原因不能呈现典型的三条带，但并不影响后续的实验。我就有师姐一直纠结与RNA条带不清晰，但是我们后续进行芯片杂交的时候发现也能满足分析的要求。所以我也建议你先进行后续的实验看看，莫纠结。另外，从电泳图上看，凝胶孔有杂质，是蛋白污染的可能性比较大，所以建议你采取相应的前处理措施。

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3楼2015-09-29 17:08:10

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