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504775490

金虫 (知名作家)

[求助] 提取肌肉组织RNA为什么总是降解?求助啊! 已有2人参与

提取大鼠肌肉组织RNA为什么总是降解啊?求助,求助!
样本都是取新鲜组织后干冰速冻,1小时以内回到实验室提取RNA。
trizol乙醇沉淀的方法提取的,最后70ulDEPC水溶解,过程中用到的吸头,离心管,器械,液氮研磨钵都灭过菌,为什么电泳处图还是这么降解严重?
电泳条件130V,20min,上样5ul电泳过程用的TAE没有进行DEPC处理,难道就是因为电泳这一步没用DEPC处理就成这样了吗?
出现这样的结果是提取RNA的问题?还是电泳过程的问题?还是样本的问题?求大侠们帮帮忙!

提取肌肉组织RNA为什么总是降解?求助啊!
RNA提取电泳图.png
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
504775490(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-12 21:18:28
504775490: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-15 19:17:02
从电泳图片看可能是以下问题:
1.取样问题     取样应该是大鼠处死1分钟内,将组织放入液氮内速冻,比干冰速冻效果好。       3颗星
2.电泳问题     电泳需要不需DEPC处理,但是需要现配的电泳缓冲液,最长时间不宜超过3天。   2颗星
3.试剂问题     所涉及的70%乙醇,建议现配先用,超净台吹干可能需要10-30分钟,建议使用过柱法,只需超净台吹5-10分钟。    1颗星
有你真好
2楼2015-02-11 11:00:58
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亲叫我石头

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
504775490(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-12 21:19:10
504775490: 金币+1, 有帮助 2015-06-15 19:17:19
我感觉是提取的问题,RNA 极易降解的,提取和保存都应该注意!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-02-11 11:07:55
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ice-bamboo

木虫 (小有名气)

小妹遇到同样的问题,请问楼主是否解决呢
生为科研
4楼2016-02-18 08:35:28
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