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金虫 (知名作家)

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[求助] 提取肌肉组织RNA为什么总是降解？求助啊！已有2人参与

提取大鼠肌肉组织RNA为什么总是降解啊？求助，求助！
样本都是取新鲜组织后干冰速冻，1小时以内回到实验室提取RNA。
trizol乙醇沉淀的方法提取的，最后70ulDEPC水溶解，过程中用到的吸头，离心管，器械，液氮研磨钵都灭过菌，为什么电泳处图还是这么降解严重？
电泳条件130V,20min,上样5ul电泳过程用的TAE没有进行DEPC处理，难道就是因为电泳这一步没用DEPC处理就成这样了吗？
出现这样的结果是提取RNA的问题？还是电泳过程的问题？还是样本的问题？求大侠们帮帮忙！

RNA提取电泳图.png

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1楼2015-02-10 21:45:46

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银虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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504775490(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-02-12 21:18:28
504775490: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-15 19:17:02

从电泳图片看可能是以下问题：
1.取样问题    取样应该是大鼠处死1分钟内，将组织放入液氮内速冻，比干冰速冻效果好。    3颗星
2.电泳问题    电泳需要不需DEPC处理，但是需要现配的电泳缓冲液，最长时间不宜超过3天。 2颗星
3.试剂问题    所涉及的70%乙醇，建议现配先用，超净台吹干可能需要10-30分钟，建议使用过柱法，只需超净台吹5-10分钟。 1颗星