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小鼹鼠

木虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选问题 已有5人参与

请教一下,什么情况下需要用蓝白斑进行筛选,是载体容易自连的情况下吗?那么载体容易自连是因为是平端的吗?如果是粘性末端就不需要了?谢谢。

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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我只能说,蓝白斑筛选是一件很多余的事,抗生素筛就足够了

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-31 19:28:31
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T 载体时间长了建议蓝白斑。
3楼2015-08-31 20:23:14
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liuchbing

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

主要是根据你的克隆的片段的容易程度,如果片段较短,就比较容易成功,如果太长,建议使用蓝白斑,提高成功率
每天进步一点点
4楼2015-09-23 14:15:39
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lchxs465

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

5楼2015-09-23 15:19:55
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MAYINGTAI

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 沉默的独角兽 at 2015-08-31 20:23:14
T 载体时间长了建议蓝白斑。

为什么?谢谢!
6楼2015-09-23 15:25:33
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lchxs465 at 2015-09-23 15:19:55
我遇到过载体自连的情况,首先我的片段比较长,而且我的载体可能质量也不是特别好,所以我进行单克隆送测后发现有大量的载体自连(最严重的时候送测15个,14个都是自连)。所以如果你的片段比较长的话还是建议蓝白筛 ...

您好,请问你是用蓝白斑筛选之后,挑选白斑的再进行单克隆的挑取,然后测序的吗?测序结果是显示自连吗?谢谢,。因为我的样品也刚刚送去测序。
7楼2015-09-23 15:51:24
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lchxs465

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

8楼2015-09-24 13:24:02
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lchxs465 at 2015-09-24 13:24:02
我没有蓝白斑筛选,直接挑克隆送测的~送测结过就是空载,和我的片段序列比不上。。所以你可以蓝白筛选试试看

好的,谢谢!
9楼2015-09-24 13:45:21
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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by MAYINGTAI at 2015-09-23 15:25:33
为什么?谢谢!...

我遇到的是,T载体时间长了容易自连。
10楼2015-09-24 16:27:33
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