应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 为什么酶切后什么都没有，连质粒都没有
141/2返回列表12下一页
查看: 3514  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

上帝的饮料

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么酶切后什么都没有，连质粒都没有 已有4人参与

构建了三个表达载体，用的是PET28a，DH5α转化，挑菌后摇了12个小时提质粒，质粒浓度都不是特别高，均在40左右。随后进行了双酶切验证，体系为10ul，酶切跑胶后什么条带都没有，应该不是DNA酶污染，别人也用了没问题。进行PCR验证是成功的，片段符合预期，求大神指导
第一个就是酶切的，最左边为Marker，后面的那个是PCR，条带正确

为什么酶切后什么都没有，连质粒都没有
Administrator 2015-07-24 22 时 28 分.jpg


为什么酶切后什么都没有，连质粒都没有-1
PCRYZCG 2015-07-25 11 时 10 分.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-27 15:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+2, ★有帮助 2015-07-27 16:57:56
是不是质粒量太少了，不知道你一共切了多少ng的？第一个图片中marker最大条带是多大分子量，上面好像隐约有条带
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-27 15:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-07-27 15:20:17
是不是质粒量太少了，不知道你一共切了多少ng的？第一个图片中marker最大条带是多大分子量，上面好像隐约有条带

质粒一共切400ng，maker最大条带是2000
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-27 15:22:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 上帝的饮料 at 2015-07-27 15:22:09
质粒一共切400ng，maker最大条带是2000...

400ng应该足够了，你可以取点质粒直接跑胶看下，如果跑不出来，酶切也看不出来，既然能P出来还是应该有质粒的
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-27 15:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上帝的饮料

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by a86052 at 2015-07-27 15:30:27
400ng应该足够了，你可以取点质粒直接跑胶看下，如果跑不出来，酶切也看不出来，既然能P出来还是应该有质粒的...

已经取过质粒直接跑胶了，依旧什么都没有
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-27 15:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 上帝的饮料 at 2015-07-27 15:41:39
已经取过质粒直接跑胶了，依旧什么都没有...

那么应该是浓度的问题了，浓度太低了，你这40可能测得不是那么准吧，不然跑胶应该能看得到的。。。不行把菌多摇些时间，摇的浓度高点，最后洗脱体积小些
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-27 16:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaofeng521

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新提取吧，我用试剂盒提取，浓度都是400以上的，你的第二张图有带，太不亮。
赞一下 回复此楼
7楼2015-07-28 10:41:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupokewang

铜虫 (小有名气)
质粒浓度问题，建立大量提取质粒，浓缩，提质粒可以用手提质粒，而不用试剂盒，另外手提质粒时菌体量要大。
赞一下 回复此楼
我相信我就是我，我相信明天。
8楼2015-07-28 10:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枭翔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
40是用什么测的？nanodrop?
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-28 14:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小kiss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我之前也遇到过这问题，后来发现是我用的酶过期了，导致酶切位点不单一，乱切，出不来条带，订了个新的酶问题就解决了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-07-28 22:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 上帝的饮料 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 13:44 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:33 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 6/300 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:11 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:11 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 13:11 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 13:00 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 13:00 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-05 12:51 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 12:16 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 11:12 by PYZmcHr5kSaq
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 11:01 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 9/450 2026-11-05 09:20 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭