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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么酶切后什么都没有,连质粒都没有 已有4人参与

构建了三个表达载体,用的是PET28a,DH5α转化,挑菌后摇了12个小时提质粒,质粒浓度都不是特别高,均在40左右。随后进行了双酶切验证,体系为10ul,酶切跑胶后什么条带都没有,应该不是DNA酶污染,别人也用了没问题。进行PCR验证是成功的,片段符合预期,求大神指导
第一个就是酶切的,最左边为Marker,后面的那个是PCR,条带正确

为什么酶切后什么都没有,连质粒都没有
Administrator 2015-07-24 22 时 28 分.jpg


为什么酶切后什么都没有,连质粒都没有-1
PCRYZCG 2015-07-25 11 时 10 分.png
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枭翔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
40是用什么测的?nanodrop?
9楼2015-07-28 14:02:29
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
上帝的饮料: 金币+2, 有帮助 2015-07-27 16:57:56
是不是质粒量太少了,不知道你一共切了多少ng的?第一个图片中marker最大条带是多大分子量,上面好像隐约有条带
2楼2015-07-27 15:20:17
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上帝的饮料

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-07-27 15:20:17
是不是质粒量太少了,不知道你一共切了多少ng的?第一个图片中marker最大条带是多大分子量,上面好像隐约有条带

质粒一共切400ng,maker最大条带是2000
3楼2015-07-27 15:22:09
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a86052

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 上帝的饮料 at 2015-07-27 15:22:09
质粒一共切400ng,maker最大条带是2000...

400ng应该足够了,你可以取点质粒直接跑胶看下,如果跑不出来,酶切也看不出来,既然能P出来还是应该有质粒的
4楼2015-07-27 15:30:27
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