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望月台木虫 (小有名气)
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[求助]
求助DNASTAR Lasergene 中Sequence Builder用于酶切克隆的问题！
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大家好!最近使用Sequence Builder用于酶切克隆遇到一个问题。我想要做的是（通过软件）：从一个质粒上切下一个片段，补平，连接到另一个质粒上（只有一个酶切位点）。 我的做法是：选中所要克隆的片段，复制，然后选中另一个质粒的那个酶切位点，克隆，在对话框中fill in 所有的碱基（相当于补平），然后点击Clone，就OK了。所要插入的片段经fill in后一切正常，该添加的碱基都添加了。 但，被插入的质粒切开（只有一个酶切位点）后，补平，我明明fill in了碱基，却没有加上去。 例如：以质粒上XhoI为例，CTCGAG， 切开后补平连上片段应该是 CTCGA ——插入的片段——TCGAG，我通过sequence builder做出来的结果是CTCGA ——插入的片段——G。不知道为什么？ 不知道有没有人遇到过这种情况，另外，需要说明的是，如果被插入的质粒是两个酶切位点的话，就不会出现这个问题。但，如果那个片段，只是插入质粒的那一个酶切位点的话，就出现这个问题，我试过多次，不知道为什么？ |
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