| 查看: 3373 | 回复: 9 | |||
[求助]
求助做过miRNA功能分析的大神们，如何对一个未知功能的新的miRNA进行分析？
|
|
额。。刚入门的小白，我要做的是昆虫中的miR-927a，但是查了之后发现没有人做过功能研究，在其他物种中也没有人做过，没法参考。。像这种miRNA,我该如何着手做呢？ 我现在有一个大致的步骤：1 对这个miRNA进行靶基因预测， 2 进行qrt-PCR分析miRNA表达量， 3 进行靶基因3‘UTR荧光素酶告基因的检测 我现在的问题是：我要做的是对miRNA 的功能进行验证，是否需要进行miRNA mimics或inhibitor的处理？ 如果需要这一步的话是在荧光素酶检测之前还是之后？但是用模拟物处理的话好像还需要知道作用的靶基因才行，如果需要知道靶基因的功能，是否需要进行GO通路分析? 现在最大的问题就是是否需要进行GO通路分析来确定靶基因，还有就是希望能帮我看看我的步骤是否需要完善. 谢谢大家！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有180人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何根据miRNA的序列预测其靶基因，有推荐的软件或网址吗
已经有7人回复
- miRNA启动子研究
已经有7人回复
- 植物miRNA干扰载体构建的大体流程
已经有5人回复
- mRNA和MicroRNA的区别
已经有12人回复
- miRNA差异表达分析时reads数目的校准（TPM）问题
已经有6人回复
- miRNA高通量测序分析时拷贝数的选取问题
已经有4人回复
- 为什么不同的miRNA编号有相同的成熟序列
已经有4人回复
- 5‘Race验证miRNA靶点的原理
已经有40人回复
- 怎么找一个药物代谢通路上的miRNA。SOS
已经有3人回复
- miRNA做实时定量的内参基因
已经有8人回复
- 针对miRNA的前体MIRNA，如何做反转录呢？
已经有8人回复
- miRNA qPCR内参基因的选择
已经有15人回复
- 同一个名字的miRNA在不同物种当中的序列一样么？
已经有5人回复
- miRNA的靶基因怎么预测啊？
已经有9人回复
- miRNA的两种调控作用是不是都属于负调控 ？
已经有5人回复
- 如何寻找并下载所有miRNA
已经有5人回复
- 疑问，miRNA如何调控蛋白质功能？
已经有5人回复
- 谁给我讲解下miRNA调控的发展现状，想往这方面发展，多谢啊
已经有6人回复
- 震撼！植物可以通过MiRNA调控动物（zz 南方周末）
已经有50人回复
- 复杂疾病关联的miRNA-mRNA功能模块识别的信息融合方法研究
已经有8人回复
- 从植物叶片的总RNA中提取出miRNA，这个miRNA是未知的，有效的方法怎么做？
已经有7人回复
2楼2015-07-07 15:37:56
guoqin_shiyin
银虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 0.4
- 散金: 57
- 红花: 3
- 帖子: 876
- 在线: 51.7小时
- 虫号: 163332
- 注册: 2006-01-11
- 性别: MM
- 专业: 微生物
3楼2015-07-08 20:22:10
小叶子924楼2015-07-08 22:42:18
5楼2015-07-09 09:35:44
6楼2015-07-09 09:37:08
7楼2015-07-09 09:38:29
8楼2015-07-09 09:46:07
9楼2015-07-11 22:29:53
|
双荧光素酶报告基因实验是通过将预测能够与miRNA结合的靶基因3’UTR序列插入载体中萤火虫荧光蛋白（firefly luciferase）的3’UTR。当我们感兴趣的miRNA和质粒中的插入序列结合后，miRNA会通过和所插入的序列结合从而抑制萤火虫荧光蛋白的翻译最终造成荧光值的下降。海肾素荧光蛋白（renilla luciferase）是作为内参来去除组间的转染效率差异的。其实你也可以理解为：用荧光值来判断miRNA是否和靶基因结合。 1、在了解原理后我们来看一下要做一次荧光素酶报告实验需要哪些东西： 1. 细胞 许多同学固执的一定要选用目的细胞来做实验，其实我们本来就是要验证分子间的相互作用，细胞只是一个媒介或载体，选用工具细胞如293T、HEK293等即可。选择工具细胞的条件总结如下： 1）好转染、且转染效率较高 2）目的microRNA的表达水平极低或不表达 2. 质粒 首先我们需要萤火虫荧光素酶3’UTR插入目的序列的载体，通常我们管它叫野生型质粒。这里要注意哦，不一定要插入靶基因的3’UTR全长。可以只插入包括miRNA结合位点前后200bp左右的序列。有的基因3’UTR有几千到上万bp。 其次我们需要萤火虫荧光素酶3’UTR插入miRNA结合位点突变的序列载体，这个短语好长啊，请各位同学看清里面的定语。通常管它叫突变型质粒。这个质粒是整个实验中至关重要的一部分。你能不能发现分子间的直接相互作用就靠它了。 当然，我们需要miRNA的过表达载体。这个不用多说了吧，没有miRNA怎么做实验呢。 最后也不能少了各种对照载体啊，包括萤火虫荧光素酶空载体，miRNA空载体还有海肾素荧光载体。 |
10楼2016-09-05 18:09:12
