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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)

[求助] miRNA启动子研究 已有1人参与

请问有做过miRNA启动子研究的吗？我现在是把miRNA的上游2300bp序列拷贝到一个没有启动子的荧光素酶上游，然后检测荧光素酶表达情况。但是做出来的结果是插入序列的跟空载体没有什么区别，下一步该怎么做啊？看到有的文献是拷贝了miRNA上游4000多bp进去，我要不要也扩大一下长度试一下？可是如果这样还是没区别可怎么办？实验方法技术应该没有问题，我做了阳性对照，将一个已知有启动子活性的序列插进去荧光素酶有很大的增加。求高人解答！急！！不胜感激！！！
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1楼 2014-09-09 08:47:09
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
炭笔橡皮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:44:57
晕。你还没找到启动活性区域，你要转化不同片段大小区域，然后寻找出启动区域，这个是找出来的，不是直接截一段就成功的（运气太好的除外）
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2楼2014-09-09 16:07:18
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bwangel at 2014-09-09 16:07:18
晕。你还没找到启动活性区域，你要转化不同片段大小区域，然后寻找出启动区域，这个是找出来的，不是直接截一段就成功的（运气太好的除外）

谢谢！不同片段大小区域有没有一个范围啊？如果miRN是由负链转录而来应该怎么做？
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3楼2014-09-09 17:40:38
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
炭笔橡皮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:45:07
一个完整的启动子区域找起来比较麻烦的，而且范围很不好说，可能还要涉及到前面的增强子，你只能不停的往上游做，直到感觉差不多了为止，要全估计难
miRNA是负链转录？这个。。。不都是ATG开始的基因么？负链转录有用么？不清楚这个
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4楼2014-09-10 08:24:51
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bwangel at 2014-09-10 08:24:51
一个完整的启动子区域找起来比较麻烦的，而且范围很不好说，可能还要涉及到前面的增强子，你只能不停的往上游做，直到感觉差不多了为止，要全估计难
miRNA是负链转录？这个。。。不都是ATG开始的基因么？负链转录有 ...

谢谢！这个感觉差不多了有没有一个大致的标准。。。我在miBase里查的那个miRNA是负链转录（或编码？我弄不清楚这有什么区别），我刚开始做启动子，实验室也没有人做过，各种纠结啊啊啊啊啊
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5楼2014-09-10 09:12:05
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13297939131

新虫 (初入文坛)
亲，我能请教你怎么找miRNA的启动子吗？

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6楼2016-05-17 15:42:36
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sayen

银虫 (小有名气)
一般在靶基因的上游2000bp是启动子区，但是并不是说把这2000bp克隆到载体上就能有效果，需要找到转录因子结合位点，在保证含有结合位点的前提下尽可能截短序列，插到载体里效果才能好

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7楼2016-05-18 10:36:00
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sayen

银虫 (小有名气)
还有如楼上说的是正义链还是反义链表达的问题，找到相应的链，再找5’端的启动子区和转录因子结合位点

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8楼2016-05-18 10:38:40
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