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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)

[求助] miRNA启动子研究 已有1人参与

请问有做过miRNA启动子研究的吗?我现在是把miRNA的上游2300bp序列拷贝到一个没有启动子的荧光素酶上游,然后检测荧光素酶表达情况。但是做出来的结果是插入序列的跟空载体没有什么区别,下一步该怎么做啊?看到有的文献是拷贝了miRNA上游4000多bp进去,我要不要也扩大一下长度试一下?可是如果这样还是没区别可怎么办?实验方法技术应该没有问题,我做了阳性对照,将一个已知有启动子活性的序列插进去荧光素酶有很大的增加。求高人解答!急!!不胜感激!!!
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
炭笔橡皮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:44:57
晕。你还没找到启动活性区域,你要转化不同片段大小区域,然后寻找出启动区域,这个是找出来的,不是直接截一段就成功的(运气太好的除外)
2楼2014-09-09 16:07:18
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bwangel at 2014-09-09 16:07:18
晕。你还没找到启动活性区域,你要转化不同片段大小区域,然后寻找出启动区域,这个是找出来的,不是直接截一段就成功的(运气太好的除外)

谢谢!不同片段大小区域有没有一个范围啊?如果miRN是由负链转录而来应该怎么做?
3楼2014-09-09 17:40:38
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
炭笔橡皮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:45:07
一个完整的启动子区域找起来比较麻烦的,而且范围很不好说,可能还要涉及到前面的增强子,你只能不停的往上游做,直到感觉差不多了为止,要全估计难
miRNA是负链转录?这个。。。不都是ATG开始的基因么?负链转录有用么?不清楚这个
4楼2014-09-10 08:24:51
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bwangel at 2014-09-10 08:24:51
一个完整的启动子区域找起来比较麻烦的,而且范围很不好说,可能还要涉及到前面的增强子,你只能不停的往上游做,直到感觉差不多了为止,要全估计难
miRNA是负链转录?这个。。。不都是ATG开始的基因么?负链转录有 ...

谢谢!这个感觉差不多了有没有一个大致的标准。。。我在miBase里查的那个miRNA是负链转录(或编码?我弄不清楚这有什么区别),我刚开始做启动子,实验室也没有人做过,各种纠结啊啊啊啊啊
5楼2014-09-10 09:12:05
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13297939131

新虫 (初入文坛)

亲,我能请教你怎么找miRNA的启动子吗?

发自小木虫Android客户端
6楼2016-05-17 15:42:36
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sayen

银虫 (小有名气)

一般在靶基因的上游2000bp是启动子区,但是并不是说把这2000bp克隆到载体上就能有效果,需要找到转录因子结合位点,在保证含有结合位点的前提下尽可能截短序列,插到载体里效果才能好

发自小木虫Android客户端
7楼2016-05-18 10:36:00
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sayen

银虫 (小有名气)

还有如楼上说的是正义链还是反义链表达的问题,找到相应的链,再找5’端的启动子区和转录因子结合位点

发自小木虫Android客户端
8楼2016-05-18 10:38:40
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