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小叶子92

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 求助做过miRNA功能分析的大神们，如何对一个未知功能的新的miRNA进行分析？

额。。刚入门的小白，我要做的是昆虫中的miR-927a，但是查了之后发现没有人做过功能研究，在其他物种中也没有人做过，没法参考。。像这种miRNA,我该如何着手做呢？
我现在有一个大致的步骤：1 对这个miRNA进行靶基因预测，
                                       2 进行qrt-PCR分析miRNA表达量，
                                       3 进行靶基因3‘UTR荧光素酶告基因的检测
         我现在的问题是：我要做的是对miRNA 的功能进行验证，是否需要进行miRNA mimics或inhibitor的处理？如果需要这一步的话是在荧光素酶检测之前还是之后？但是用模拟物处理的话好像还需要知道作用的靶基因才行，如果需要知道靶基因的功能，是否需要进行GO通路分析?
            现在最大的问题就是是否需要进行GO通路分析来确定靶基因，还有就是希望能帮我看看我的步骤是否需要完善.
谢谢大家！！！

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1楼 2015-07-07 14:50:57

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小叶子92

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 小小逍遥人 at 2015-07-08 22:42:18
3‘RACE 确定miRNA转录起始位点，chip是染色质免疫沉淀技术（ChromatinImmunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因 ...

我现在的靶基因还有序列都处于预测阶段，就是我做的这个物种上还没有人研究miRNA这个方面，所以我想知道能不能使用这个技术？而且我看这个技术比较复杂，重复性低，所以我觉得我的老板估计不会让我弄这个，，所以想问问是否还有别的方法？？谢谢！！！