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linden00

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达的蛋白可溶，但是活性很低，如何提高活性？已有2人参与

BL21中表达的蛋白大部分可溶，但是EMSA检测活性很低，诱导条件是25度3h，IPTG 1mM。怎么提高活性呢？是否要继续降低温度到18度，18度的话是诱导3h还是过夜？
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1楼2015-07-07 10:52:00
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
表达的重组蛋白，没有正确折叠，有可能是缺少辅助因子，建议诱导的时候就加进去
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2楼2015-07-07 11:04:03
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linden00

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-07-07 11:04:03
表达的重组蛋白，没有正确折叠，有可能是缺少辅助因子，建议诱导的时候就加进去

什么辅助因子呢？看文献都没有提到
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-07-08 09:43:47
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
linden00: 金币+3, ★有帮助 2015-07-15 10:48:20
可以继续尝试低温表达，16-18度过夜培养。或是更换表达菌株，如rosetta菌株等。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
4楼2015-07-08 10:00:09
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