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linden00

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达的蛋白可溶,但是活性很低,如何提高活性? 已有2人参与

BL21中表达的蛋白大部分可溶,但是EMSA检测活性很低,诱导条件是25度3h,IPTG 1mM。怎么提高活性呢?是否要继续降低温度到18度,18度的话是诱导3h还是过夜?
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biosci

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
表达的重组蛋白,没有正确折叠,有可能是缺少辅助因子,建议诱导的时候就加进去
2楼2015-07-07 11:04:03
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linden00

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2015-07-07 11:04:03
表达的重组蛋白,没有正确折叠,有可能是缺少辅助因子,建议诱导的时候就加进去

什么辅助因子呢?看文献都没有提到
3楼2015-07-08 09:43:47
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
linden00: 金币+3, 有帮助 2015-07-15 10:48:20
可以继续尝试低温表达,16-18度过夜培养。或是更换表达菌株,如rosetta菌株等。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
4楼2015-07-08 10:00:09
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