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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 裂解液提蛋白
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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] 裂解液提蛋白 已有4人参与

我用裂解液提蛋白，离心后，说是取上清液，可是我离心后，不分层也没有沉淀，我想问一下是什么原因啊
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1楼 2015-06-27 10:45:41
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yanjunyan

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
mtyx: 金币+1, ★有帮助 2015-06-30 21:10:36
我一般用6cm皿，裂解液其中蛋白酶抑制剂含量为百分之一，加入80-110微升，具体要看细胞密度了。裂解液要覆盖在细胞上，冰上裂解15min，其实4度冰箱我也用过，不影响。然后用细胞刮刮取细胞，收集于EP管种，4度1500rpm离心15min，小心吸取上清即可。

[ 发自小木虫客户端 ]
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在平淡中给自己一个动力，在昂扬中留给自己一份淡泊，在匆忙中让心灵得到释放，在喧闹中找寻一片宁静的天空。
8楼2015-06-30 16:00:38
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sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提的是什么蛋白呢？细胞还是组织？多少量对应了多少裂解液呢？是不是加的太少了，没有完全裂解呢。
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2楼2015-06-27 16:39:33
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mtyx: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-27 21:22:09
楼主提的样品是什么，细胞还是组织，如果是细胞的话，放入裂解液后将细胞团吹散，冰上裂解30min，12000rpm，4度离心15min取上清即可，如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎，可以匀浆，也可以液氮研磨，之后加裂解液冰上裂解30min，之后的步骤是一样的。裂解液中记得加入蛋白酶抑制剂，冰上裂解中间可以混匀几次。祝好~~
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3楼2015-06-27 17:59:43
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mtyx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 504775490 at 2015-06-27 17:59:43
楼主提的样品是什么，细胞还是组织，如果是细胞的话，放入裂解液后将细胞团吹散，冰上裂解30min，12000rpm，4度离心15min取上清即可，如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎，可以匀浆，也可以液氮研磨，之后加裂解 ...

是细胞，12孔板，每孔加入100ul的裂解液
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4楼2015-06-29 11:02:26
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