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汕头大学海洋科学接受调剂
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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] 裂解液提蛋白 已有4人参与

我用裂解液提蛋白,离心后,说是取上清液,可是我离心后,不分层也没有沉淀,我想问一下是什么原因啊
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yanjunyan

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-06-30 21:10:36
我一般用6cm皿,裂解液其中蛋白酶抑制剂含量为百分之一,加入80-110微升,具体要看细胞密度了。裂解液要覆盖在细胞上,冰上裂解15min,其实4度冰箱我也用过,不影响。然后用细胞刮刮取细胞,收集于EP管种,4度1500rpm离心15min,小心吸取上清即可。

[ 发自小木虫客户端 ]
在平淡中给自己一个动力,在昂扬中留给自己一份淡泊,在匆忙中让心灵得到释放,在喧闹中找寻一片宁静的天空。
8楼2015-06-30 16:00:38
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查看全部 9 个回答

sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提的是什么蛋白呢?细胞还是组织?多少量对应了多少裂解液呢?是不是加的太少了,没有完全裂解呢。
2楼2015-06-27 16:39:33
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-27 21:22:09
楼主提的样品是什么,细胞还是组织,如果是细胞的话,放入裂解液后将细胞团吹散,冰上裂解30min,12000rpm,4度离心15min取上清即可,如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎,可以匀浆,也可以液氮研磨,之后加裂解液冰上裂解30min,之后的步骤是一样的。裂解液中记得加入蛋白酶抑制剂,冰上裂解中间可以混匀几次。祝好~~
3楼2015-06-27 17:59:43
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mtyx

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 504775490 at 2015-06-27 17:59:43
楼主提的样品是什么,细胞还是组织,如果是细胞的话,放入裂解液后将细胞团吹散,冰上裂解30min,12000rpm,4度离心15min取上清即可,如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎,可以匀浆,也可以液氮研磨,之后加裂解 ...

是细胞,12孔板,每孔加入100ul的裂解液
4楼2015-06-29 11:02:26
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