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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菜鸟求助，我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液，他们有什么区别
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jozsh

新虫 (小有名气)

[求助] 菜鸟求助，我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液，他们有什么区别

我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液，他们有什么区别，以前一直没有注意。到底什么情况用变性，什么情况不用变性的！！！！！困惑啊困惑！！！！！！
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交流~
1楼 2013-03-14 11:18:25
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coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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jozsh: 金币+11, ★有帮助 2013-03-15 16:41:26
不知提的蛋白是全蛋白还是别的？一般来说要求提的蛋白有活性就用非变性的，比如硫铵沉淀，要求无活性那就是SDS或者其它变性剂处理。关键在于实验目的吧！
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要有最遥远的梦想
2楼2013-03-15 09:03:11
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jozsh

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by coelicolor at 2013-03-15 09:03:11
不知提的蛋白是全蛋白还是别的？一般来说要求提的蛋白有活性就用非变性的，比如硫铵沉淀，要求无活性那就是SDS或者其它变性剂处理。关键在于实验目的吧！

那普通的wenstern 和免疫组化呢？
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交流~
3楼2013-03-15 09:04:26
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jozsh: 金币+11, ★有帮助 2013-03-15 16:41:16
我的理解：

变性的裂解液一般加了DTT或beta巯基乙醇，裂解后直接煮，用于后续分析. 多用于比较敏感的翻译后修饰（如磷酸化、乙酰化）的分析；

非变性的裂解液的话，应该没加DTT或deta巯基乙醇，裂解完样品，煮之前再加，比较常规的做法。
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4楼2013-03-15 09:34:54
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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jozsh: 金币+33, ★★★很有帮助 2013-03-15 16:41:05
不知道你指的是不是裂解细胞所用的裂解液，非变性的裂解液一般用的是弱的阴离子去污剂，像NP-40或Tween-20等，这些分子一般不会导致蛋白质变性，因此使得蛋白特别是膜蛋白保持天然状态。而变性的裂解液一般是加SDS，还有另外一些强的变性剂，它们能够使得蛋白完全变性，至于普通的western一般都是用的SDS，免疫组化情况较为复杂，你可以选择Triton-100或Tween-20，也可以用Saponin，很少听所用SDS的。完全的变性一般是有机溶剂去脂
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immunologyparasite
5楼2013-03-15 09:43:09
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