24小时热门版块排行榜    

查看: 7268  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jozsh

新虫 (小有名气)

[求助] 菜鸟求助,我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液,他们有什么区别

我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液,他们有什么区别,以前一直没有注意。到底什么情况用变性,什么情况不用变性的!!!!!困惑啊困惑!!!!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 质粒构建

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

交流~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jozsh

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by coelicolor at 2013-03-15 09:03:11
不知提的蛋白是全蛋白还是别的?一般来说要求提的蛋白有活性就用非变性的,比如硫铵沉淀,要求无活性那就是SDS或者其它变性剂处理。关键在于实验目的吧!

那普通的wenstern 和免疫组化呢?
交流~
3楼2013-03-15 09:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jozsh: 金币+11, 有帮助 2013-03-15 16:41:26
不知提的蛋白是全蛋白还是别的?一般来说要求提的蛋白有活性就用非变性的,比如硫铵沉淀,要求无活性那就是SDS或者其它变性剂处理。关键在于实验目的吧!
要有最遥远的梦想
2楼2013-03-15 09:03:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jozsh: 金币+11, 有帮助 2013-03-15 16:41:16
我的理解:

变性的裂解液一般加了DTT或beta巯基乙醇,裂解后直接煮,用于后续分析. 多用于比较敏感的翻译后修饰(如磷酸化、乙酰化)的分析;

非变性的裂解液的话,应该没加DTT或deta巯基乙醇,裂解完样品,煮之前再加,比较常规的做法。
4楼2013-03-15 09:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jozsh: 金币+33, ★★★很有帮助 2013-03-15 16:41:05
不知道你指的是不是裂解细胞所用的裂解液,非变性的裂解液一般用的是弱的阴离子去污剂,像NP-40或Tween-20等,这些分子一般不会导致蛋白质变性,因此使得蛋白特别是膜蛋白保持天然状态。而变性的裂解液一般是加SDS,还有另外一些强的变性剂,它们能够使得蛋白完全变性,至于普通的western一般都是用的SDS,免疫组化情况较为复杂,你可以选择Triton-100或Tween-20,也可以用Saponin,很少听所用SDS的。完全的变性一般是有机溶剂去脂
immunologyparasite
5楼2013-03-15 09:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见