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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白变性后为什么还要煮？？
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水水726

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】蛋白变性后为什么还要煮？？ 已有6人参与

师姐的做法：蛋白加入loading buffer煮沸变性，放置-20保存，上样前取出再煮沸2分钟离心。

请问为什么变性后的蛋白要再煮沸啊？？多煮次会对蛋白有影响么？不煮的话能直接上样么？从-20取出需放置冰上化解么？？？
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1楼 2011-04-11 16:11:35
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-11 20:02:07
加入loading煮沸变性后，放置-20保存，再拿出来用没必要再煮沸了，室温溶解即可。煮沸的目的无非是让SDS和蛋白结合，再来可让样品中蛋白酶失活，防止样品降解，煮一次就够了。多煮有没有副作用不清楚...
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2楼2011-04-11 18:01:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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silicare(金币+1): 是有这么一说 2011-04-12 13:49:50
有一个说法是，去除一些亚稳态的结构，保证分子量对头
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3楼2011-04-11 19:33:19
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leiking

木虫 (正式写手)

中医药
★ ★
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silicare(金币+1): SDS低温析出很关键 2011-04-12 13:50:21
我们WB的提取蛋白也是只煮了一次，只是每次上样前要先待SDS都融解混匀再上样。
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4楼2011-04-11 19:46:37
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
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silicare(金币+1): 很在理 2011-04-12 13:50:35
煮后就上样，冻它干什么
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5楼2011-04-12 12:58:35
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★
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silicare(金币+3, EPI+1): 经验之谈 2011-04-12 13:49:32
蛋白样品加 loading buffer 煮3-5min， 最好立即就上样。

如果不立即上样，一定要-20℃以下立即保存，否则电泳出来的蛋白条带就会变浅，变模糊。


样品在-20摄氏度以下 拿出来的，室温几分钟即化开，混匀，立即上样即可。
不用反复煮。

反复煮也会使得蛋白条带变浅，变模糊。


我都是-20℃以细胞形式保存蛋白，经验发现，这比加 loading buffer 煮的样品保存效果更好。

总之，就是煮了就上样最好！不上样就不煮，直接冷冻保存。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2011-04-12 13:08:52
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小耗子大脾气

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-04-12 13:08:52
蛋白样品加 loading buffer 煮3-5min， 最好立即就上样。

如果不立即上样，一定要-20℃以下立即保存，否则电泳出来的蛋白条带就会变浅，变模糊。


样品在-20摄氏度以下 拿出来的，室温几分钟即化开，混匀，立 ...

最近实验室在做一种蛋白，安以前做的煮后上杨结果没有什么结果，而不煮上样，反而能得到想要的条带，这是什么原因呢
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耐得住寂寞才能熬的到盛放
7楼2015-03-25 10:15:13
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