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【求助】蛋白变性后为什么还要煮？？已有6人参与
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师姐的做法：蛋白加入loading buffer煮沸变性，放置-20保存，上样前取出再煮沸2分钟离心。 请问为什么变性后的蛋白要再煮沸啊？？多煮次会对蛋白有影响么？不煮的话能直接上样么？从-20取出需放置冰上化解么？？？ |
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314300420
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2楼2011-04-11 18:01:53
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+3, EPI+1): 经验之谈 2011-04-12 13:49:32
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蛋白样品加 loading buffer 煮3-5min， 最好立即就上样。 如果不立即上样，一定要-20℃以下立即保存，否则电泳出来的蛋白条带就会变浅，变模糊。 样品在-20摄氏度以下 拿出来的，室温几分钟即化开，混匀，立即上样即可。 不用反复煮。 反复煮也会使得蛋白条带变浅，变模糊。 我都是-20℃以细胞形式保存蛋白，经验发现，这比加 loading buffer 煮的样品保存效果更好。 总之，就是煮了就上样最好！不上样就不煮，直接冷冻保存。 |
6楼2011-04-12 13:08:52
7楼2015-03-25 10:15:13