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jozsh

新虫 (小有名气)

[求助] 菜鸟求助,我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液,他们有什么区别

我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液,他们有什么区别,以前一直没有注意。到底什么情况用变性,什么情况不用变性的!!!!!困惑啊困惑!!!!!!
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jozsh: 金币+11, 有帮助 2013-03-15 16:41:16
我的理解:

变性的裂解液一般加了DTT或beta巯基乙醇,裂解后直接煮,用于后续分析. 多用于比较敏感的翻译后修饰(如磷酸化、乙酰化)的分析;

非变性的裂解液的话,应该没加DTT或deta巯基乙醇,裂解完样品,煮之前再加,比较常规的做法。
4楼2013-03-15 09:34:54
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coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jozsh: 金币+11, 有帮助 2013-03-15 16:41:26
不知提的蛋白是全蛋白还是别的?一般来说要求提的蛋白有活性就用非变性的,比如硫铵沉淀,要求无活性那就是SDS或者其它变性剂处理。关键在于实验目的吧!
要有最遥远的梦想
2楼2013-03-15 09:03:11
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jozsh

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by coelicolor at 2013-03-15 09:03:11
不知提的蛋白是全蛋白还是别的?一般来说要求提的蛋白有活性就用非变性的,比如硫铵沉淀,要求无活性那就是SDS或者其它变性剂处理。关键在于实验目的吧!

那普通的wenstern 和免疫组化呢?
交流~
3楼2013-03-15 09:04:26
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jozsh: 金币+33, ★★★很有帮助 2013-03-15 16:41:05
不知道你指的是不是裂解细胞所用的裂解液,非变性的裂解液一般用的是弱的阴离子去污剂,像NP-40或Tween-20等,这些分子一般不会导致蛋白质变性,因此使得蛋白特别是膜蛋白保持天然状态。而变性的裂解液一般是加SDS,还有另外一些强的变性剂,它们能够使得蛋白完全变性,至于普通的western一般都是用的SDS,免疫组化情况较为复杂,你可以选择Triton-100或Tween-20,也可以用Saponin,很少听所用SDS的。完全的变性一般是有机溶剂去脂
immunologyparasite
5楼2013-03-15 09:43:09
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