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汕头大学海洋科学接受调剂
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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] 裂解液提蛋白 已有4人参与

我用裂解液提蛋白,离心后,说是取上清液,可是我离心后,不分层也没有沉淀,我想问一下是什么原因啊
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-27 21:22:09
楼主提的样品是什么,细胞还是组织,如果是细胞的话,放入裂解液后将细胞团吹散,冰上裂解30min,12000rpm,4度离心15min取上清即可,如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎,可以匀浆,也可以液氮研磨,之后加裂解液冰上裂解30min,之后的步骤是一样的。裂解液中记得加入蛋白酶抑制剂,冰上裂解中间可以混匀几次。祝好~~
3楼2015-06-27 17:59:43
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sageyaya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提的是什么蛋白呢?细胞还是组织?多少量对应了多少裂解液呢?是不是加的太少了,没有完全裂解呢。
2楼2015-06-27 16:39:33
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mtyx

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 504775490 at 2015-06-27 17:59:43
楼主提的样品是什么,细胞还是组织,如果是细胞的话,放入裂解液后将细胞团吹散,冰上裂解30min,12000rpm,4度离心15min取上清即可,如果是组织的话要先将组织样本冰上磨碎,可以匀浆,也可以液氮研磨,之后加裂解 ...

是细胞,12孔板,每孔加入100ul的裂解液
4楼2015-06-29 11:02:26
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曼舞流苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-06-30 08:47:12
引用回帖:
4楼: Originally posted by mtyx at 2015-06-29 11:02:26
是细胞,12孔板,每孔加入100ul的裂解液...

哇,我提蛋白用六孔板都嫌小,你居然用12孔板,还每孔100ul裂解液,估计蛋白浓度超低,建议6cm皿或者10cm皿养细胞。
5楼2015-06-29 14:40:37
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