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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量pcr,需要将不同样品的DNA稀释成相同的浓度吗？比如说都是20ng/ul
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michelly555

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr,需要将不同样品的DNA稀释成相同的浓度吗？比如说都是20ng/ul 已有2人参与

做荧光定量pcr的时候， 需要将不同样品的DNA稀释成相同的浓度吗？比如说都是20ng/ul,如果浓度差别较大的话，会有什么影响呢？急求助帖

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1楼 2015-06-07 08:01:07
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小-丑鱼

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8楼: Originally posted by michelly555 at 2015-06-07 12:14:10
我说的不是这个意思，就是说我想要对比这两个样之间菌的数量，但是两个样品提取的DNA的浓度不同，在做qpcr时需要将他们都稀释成相同的浓度吗？比如20ng|ul.都加1ul
...

我不太确定自己有没有明白你的意思，如果只是想要比较两个样之间菌的数量，那提出的DNA浓度不同，已经说明了差距，你是想用qpcr的方法把这种差距具体明确出来？如果是这样的话，实验的体系都一样，模板加入量也一样，例如1ul，但各自浓度不同，辅以标准品做出标准曲线，通过这种方式也能达到目的。
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放不下的，除了手中的金箍棒，还有你的手。
9楼2015-06-07 22:24:06
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小-丑鱼

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michelly555: 金币+7, ★★★很有帮助 2015-06-07 10:04:29
如果浓度不一样，加的量却一样，那么最终得到的结果怎样和对照组比较？
稀释成同一浓度并且加入同样的量的目的，个人认为应该是为了更好的对比。
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2楼2015-06-07 09:58:54
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小-丑鱼

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2楼: Originally posted by 小-丑鱼 at 2015-06-07 09:58:54
如果浓度不一样，加的量却一样，那么最终得到的结果怎样和对照组比较？
稀释成同一浓度并且加入同样的量的目的，个人认为应该是为了更好的对比。

浓度差别很大的话，导致实际加入的模板量差别很大，扩增得到的结果也会有很大差异，最直接的就体现在CT值上。
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3楼2015-06-07 10:01:12
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michelly555

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3楼: Originally posted by 小-丑鱼 at 2015-06-07 10:01:12
浓度差别很大的话，导致实际加入的模板量差别很大，扩增得到的结果也会有很大差异，最直接的就体现在CT值上。...

我还想问一下，对于不同样品，我们用相同质量的土壤，来提取dna,提取出来的浓度有80还有150ng/ul的，这种差异是样品本身影响的还是试剂盒呢？

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4楼2015-06-07 10:23:48
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michelly555

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4楼: Originally posted by michelly555 at 2015-06-07 10:23:48
我还想问一下，对于不同样品，我们用相同质量的土壤，来提取dna,提取出来的浓度有80还有150ng/ul的，这种差异是样品本身影响的还是试剂盒呢？
...

我们做pcr时要把DNA模板都稀释成20ng/ul再做吗？谢谢了,因为自己真是有点混乱了

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5楼2015-06-07 10:26:15
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小-丑鱼

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4楼: Originally posted by michelly555 at 2015-06-07 10:23:48
我还想问一下，对于不同样品，我们用相同质量的土壤，来提取dna,提取出来的浓度有80还有150ng/ul的，这种差异是样品本身影响的还是试剂盒呢？
...

都会有因素在其中，但具体是样品本身影响大还是试剂盒影响大，需要做实验才能比对出来。
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6楼2015-06-07 11:24:13
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小-丑鱼

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5楼: Originally posted by michelly555 at 2015-06-07 10:26:15
我们做pcr时要把DNA模板都稀释成20ng/ul再做吗？谢谢了,因为自己真是有点混乱了
...

这个不是确定的，但唯一要确定的是所有样本量一致，例如确定下来要加的模板量为20ng，那就可以稀释成20ng/ul，加1ul，或者稀释成10ng/ul，加2ul，类推。
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7楼2015-06-07 11:27:18
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michelly555

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7楼: Originally posted by 小-丑鱼 at 2015-06-07 11:27:18
这个不是确定的，但唯一要确定的是所有样本量一致，例如确定下来要加的模板量为20ng，那就可以稀释成20ng/ul，加1ul，或者稀释成10ng/ul，加2ul，类推。...

我说的不是这个意思，就是说我想要对比这两个样之间菌的数量，但是两个样品提取的DNA的浓度不同，在做qpcr时需要将他们都稀释成相同的浓度吗？比如20ng|ul.都加1ul

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8楼2015-06-07 12:14:10
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michelly555

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9楼: Originally posted by 小-丑鱼 at 2015-06-07 22:24:06
我不太确定自己有没有明白你的意思，如果只是想要比较两个样之间菌的数量，那提出的DNA浓度不同，已经说明了差距，你是想用qpcr的方法把这种差距具体明确出来？如果是这样的话，实验的体系都一样，模板加入量也一样 ...

我也想明白了，之前受了些误导，谢谢你哈

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10楼2015-06-07 23:30:21
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