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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于超声波破碎大肠杆菌
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lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 关于超声波破碎大肠杆菌 已有2人参与

我用的超声波破碎仪的最大功率是400w，我用的输出功率是50%，6号变幅杆超声2s，间歇3s，总时间15min，菌液是100ml的培养液离心去上清后重悬于10ml的buffer里面，超声后未见澄清，是怎么回事呢？
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1楼 2015-06-03 22:36:58
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liulingjun15

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很显然破碎时间不够，我也在做原核表达，破碎时间都在半小时以上。另外如楼上所说，要注意培养温度，一旦形成包涵体很难提蛋白。
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3楼2015-07-02 20:06:26
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxl1213: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-22 19:20:32
可以把时间延长一会，确定是否是蛋白破碎不完全造成的，然后离心，把上清和沉淀一起跑个胶看看就知道了。
还有你的大肠杆菌的培养条件是什么啊？如果形成包涵体后表达蛋白就很难溶解，需要通过尿素变性来获得你的目的蛋白。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-06-05 11:34:21
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