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lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 关于超声波破碎大肠杆菌 已有2人参与

我用的超声波破碎仪的最大功率是400w,我用的输出功率是50%,6号变幅杆超声2s,间歇3s,总时间15min,菌液是100ml的培养液离心去上清后重悬于10ml的buffer里面,超声后未见澄清,是怎么回事呢?
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lxl1213: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-22 19:20:32
可以把时间延长一会,确定是否是蛋白破碎不完全造成的,然后离心,把上清和沉淀一起跑个胶看看就知道了。
还有你的大肠杆菌的培养条件是什么啊?如果形成包涵体后表达蛋白就很难溶解,需要通过尿素变性来获得你的目的蛋白。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-06-05 11:34:21
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liulingjun15

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很显然破碎时间不够,我也在做原核表达,破碎时间都在半小时以上。另外如楼上所说,要注意培养温度,一旦形成包涵体很难提蛋白。
3楼2015-07-02 20:06:26
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