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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒转入BL21菌中发现菌生长很慢这是什么原因
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风雪云

木虫 (小有名气)

[交流] 质粒转入BL21菌中发现菌生长很慢这是什么原因 已有12人参与

最近做基因重组，目的片段插入到PET15b中，转入DH5α长出单克隆并测序成功，然后提取的质粒再转入到BL21中进行培养，有时候小培正常，但是扩大培养的时候生长很缓慢，还有甚者挑的单克隆小培有时候生长也很缓慢，从来没有遇到过这么奇葩的情况，这是什么问题啊？
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1楼 2015-06-01 16:48:40
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zhang6871

银虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-02 23:14:20
BL21本来就要比常用的克隆菌株长的慢，但不会很多。
如果非常慢可能是培养基出问题了。或者就是表达的蛋白可能有毒性。
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
2楼2015-06-01 18:18:03
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风雪云

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang6871 at 2015-06-01 18:18:03
BL21本来就要比常用的克隆菌株长的慢，但不会很多。
如果非常慢可能是培养基出问题了。或者就是表达的蛋白可能有毒性。

培养基应该没事，因为培养别的菌还挺正常的，就是培养这个就不行老是不能扩大培养。还有我以前做过比我这个目的片段截短的还能表达出来，到这个反倒不行了，真的很郁闷。
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3楼2015-06-01 19:43:19
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my_father

铁虫 (初入文坛)
★
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可能是质粒低拷贝，抗性不强吧。。。
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4楼2015-06-01 23:29:31
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风雪云

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by my_father at 2015-06-01 23:29:31
可能是质粒低拷贝，抗性不强吧。。。

不是这个问题

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5楼2015-06-02 00:15:55
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
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很慢是个什么概念？能不能说清楚点不要让人去猜。扩培加了多少菌？扩培了多长时间？OD值到多少？

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大家相互帮助哈
6楼2015-06-02 00:50:54
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风雪云

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-06-02 00:50:54
很慢是个什么概念？能不能说清楚点不要让人去猜。扩培加了多少菌？扩培了多长时间？OD值到多少？

扩大培养有时候就长不起来，有时候长起来竟然用了8个小时。接菌的量而且比正常接菌多了一倍。
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7楼2015-06-02 21:30:34
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luwei13566

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by 风雪云 at 2015-06-02 21:30:34
扩大培养有时候就长不起来，有时候长起来竟然用了8个小时。接菌的量而且比正常接菌多了一倍。...

扩培的时候你的培养基里加氨苄了没？
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大家相互帮助哈
8楼2015-06-02 22:21:57
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xuebaobingyu

金虫 (正式写手)
蛋白毒性

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9楼2015-06-02 22:43:32
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xuebaobingyu

金虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by xuebaobingyu at 2015-06-02 22:43:32
蛋白毒性

诱导后细菌都死了  越来越清

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10楼2015-06-02 22:44:21
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