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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 分别取两对引物中的一条来进行PCR为什么没有条带？
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

[求助] 分别取两对引物中的一条来进行PCR为什么没有条带？ 已有1人参与

我用目的基因的引物（长度分别为48、27bp）进行PCR，有目的条带（~1500bp）
在目的基因两端一定位置处又设计了一对引物（长度分别为22、25bp）做PCR，也有目的条带（~4800bp），其中PCR产物包括我的目的基因
但是我分别取第二对引物的正向和第一对引物的反向，以及第一对引物的正向和第二对引物的反向做PCR，均没有条带
这是为什么？
其中，第一对引物的退火温度为50度，时间1min（好像有点长）
第二对引物退火温度为59度，时间30s
其他条件基本都一样，酶用的是LA酶
我温度梯度，从50-59都设过了，还是没有结果
问题出在哪里呢？
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1楼 2015-05-27 15:01:08
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by young1983 at 2015-05-27 15:57:51
看看引物之间是否形成能二聚体；若GC含量过高可加enhancer。

没有形成二聚体，而且GC含量也比较正常
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3楼2015-05-27 17:54:54
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young1983

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
杨柳依依625: 金币+1, ★有帮助 2015-05-28 09:15:29
看看引物之间是否形成能二聚体；若GC含量过高可加enhancer。
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-27 15:57:51
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)
有人说长引物的话，可以缩短延伸时间，不知道是什么道理
但我的引物相对之前的两对也不长啊
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4楼2015-05-28 09:16:41
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