24小时热门版块排行榜    

查看: 907  |  回复: 3

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

[求助] 分别取两对引物中的一条来进行PCR为什么没有条带? 已有1人参与

我用目的基因的引物(长度分别为48、27bp)进行PCR,有目的条带(~1500bp)
在目的基因两端一定位置处又设计了一对引物(长度分别为22、25bp)做PCR,也有目的条带(~4800bp),其中PCR产物包括我的目的基因
但是我分别取第二对引物的正向和第一对引物的反向,以及第一对引物的正向和第二对引物的反向做PCR,均没有条带
这是为什么?
其中,第一对引物的退火温度为50度,时间1min(好像有点长)
第二对引物退火温度为59度,时间30s
其他条件基本都一样,酶用的是LA酶
我温度梯度,从50-59都设过了,还是没有结果
问题出在哪里呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

young1983

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
杨柳依依625: 金币+1, 有帮助 2015-05-28 09:15:29
看看引物之间是否形成能二聚体;若GC含量过高可加enhancer。
2楼2015-05-27 15:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by young1983 at 2015-05-27 15:57:51
看看引物之间是否形成能二聚体;若GC含量过高可加enhancer。

没有形成二聚体,而且GC含量也比较正常
3楼2015-05-27 17:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

有人说长引物的话,可以缩短延伸时间,不知道是什么道理
但我的引物相对之前的两对也不长啊
4楼2015-05-28 09:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杨柳依依625 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见