24小时热门版块排行榜    

查看: 937  |  回复: 3

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

[求助] 分别取两对引物中的一条来进行PCR为什么没有条带? 已有1人参与

我用目的基因的引物(长度分别为48、27bp)进行PCR,有目的条带(~1500bp)
在目的基因两端一定位置处又设计了一对引物(长度分别为22、25bp)做PCR,也有目的条带(~4800bp),其中PCR产物包括我的目的基因
但是我分别取第二对引物的正向和第一对引物的反向,以及第一对引物的正向和第二对引物的反向做PCR,均没有条带
这是为什么?
其中,第一对引物的退火温度为50度,时间1min(好像有点长)
第二对引物退火温度为59度,时间30s
其他条件基本都一样,酶用的是LA酶
我温度梯度,从50-59都设过了,还是没有结果
问题出在哪里呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

young1983

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
杨柳依依625: 金币+1, 有帮助 2015-05-28 09:15:29
看看引物之间是否形成能二聚体;若GC含量过高可加enhancer。
2楼2015-05-27 15:57:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by young1983 at 2015-05-27 15:57:51
看看引物之间是否形成能二聚体;若GC含量过高可加enhancer。

没有形成二聚体,而且GC含量也比较正常
3楼2015-05-27 17:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

有人说长引物的话,可以缩短延伸时间,不知道是什么道理
但我的引物相对之前的两对也不长啊
4楼2015-05-28 09:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杨柳依依625 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:36 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:27 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:51 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:11 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 04:51 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 04:47 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-16 04:23 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-16 03:38 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-16 03:23 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 18:47 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:59 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:02 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
信息提示
请填处理意见