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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

[求助] 分别取两对引物中的一条来进行PCR为什么没有条带? 已有1人参与

我用目的基因的引物(长度分别为48、27bp)进行PCR,有目的条带(~1500bp)
在目的基因两端一定位置处又设计了一对引物(长度分别为22、25bp)做PCR,也有目的条带(~4800bp),其中PCR产物包括我的目的基因
但是我分别取第二对引物的正向和第一对引物的反向,以及第一对引物的正向和第二对引物的反向做PCR,均没有条带
这是为什么?
其中,第一对引物的退火温度为50度,时间1min(好像有点长)
第二对引物退火温度为59度,时间30s
其他条件基本都一样,酶用的是LA酶
我温度梯度,从50-59都设过了,还是没有结果
问题出在哪里呢?
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young1983

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
杨柳依依625: 金币+1, 有帮助 2015-05-28 09:15:29
看看引物之间是否形成能二聚体;若GC含量过高可加enhancer。
2楼2015-05-27 15:57:51
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by young1983 at 2015-05-27 15:57:51
看看引物之间是否形成能二聚体;若GC含量过高可加enhancer。

没有形成二聚体,而且GC含量也比较正常
3楼2015-05-27 17:54:54
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杨柳依依625

铁虫 (小有名气)

有人说长引物的话,可以缩短延伸时间,不知道是什么道理
但我的引物相对之前的两对也不长啊
4楼2015-05-28 09:16:41
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