应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 大分子蛋白的原核表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1136  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhangjie2005

木虫 (小有名气)

[求助] 大分子蛋白的原核表达 已有1人参与

本人初涉蛋白表达领域，要做的蛋白分子较大，有900个氨基酸，看文献中是先做一下蛋白可溶性分析和免疫原性分析，然后再做部分片段的原核表达。想请问一下应该怎么做这两种分析？用什么软件？跪谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-20 10:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie2005

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-05-21 09:18:31
嗯，因为我主要从事的是蛋白表达的下游实验部分，所以对上游的分析做的比较少，我找同事问了一下，他们给我一个网址，你可以到上面对你的蛋白进行一下测试。祝你成功
http://mips.helmholtz-muenchen.de/proso/pr ...

这个网站很好，非常感谢！
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-21 20:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangjie2005: 金币+5, ★有帮助 2015-05-20 17:33:34
蛋白的可溶性分析通常是用SDS-PAGE来做，具体操作如下：
诱导表达后，12000 rpm离心1 min收获菌体，50 mL菌液沉淀用5 mL结合缓冲液重悬，经超声波充分破碎后离心，沉淀重悬于1/10 体积的结合缓冲液中，分别取上清及沉淀进行电泳分析。取1.5ml诱导后的菌液，离心后将菌体重悬于100 ul Buffer A中，冰浴30分钟。离心收集菌体，上清即为周质蛋白部分，沉淀重悬于0.1mol/L Tris-HCl（PH8.0）溶液中，冻融破碎细胞，离心，上清为胞质部分，沉淀部分为不溶性包涵体和细胞膜组分。将各组分加入SDS-PAGE样品缓冲液，进行SDS-PAGE分析。
结合缓冲液: 0.5 mol/LNaCl，20 mmol/L Tris•Cl，2 mmol/L ZnCl2，5 mmol/L咪唑，PH7.5
Buffer A: 1mg/ml 溶菌酶、20% 蔗糖、30 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L EDTA，PH8.0.
注意大分子蛋白表达时很容易降解

免疫原性检测可以用Western Blot来做
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-05-20 11:40:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjie2005

木虫 (小有名气)
谢谢您的回复！我现在的问题是蛋白分子太大，不好做全长表达，所以想只表达其中一部分片段，这个选择要有个依据，该怎么选？有没有软件可以预测蛋白分子的可溶性和免疫原性，也就是说预测一下看抗原决定簇在哪部分？多谢！
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-20 17:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangjie2005 at 2015-05-20 17:32:39
谢谢您的回复！我现在的问题是蛋白分子太大，不好做全长表达，所以想只表达其中一部分片段，这个选择要有个依据，该怎么选？有没有软件可以预测蛋白分子的可溶性和免疫原性，也就是说预测一下看抗原决定簇在哪部分？ ...

嗯，因为我主要从事的是蛋白表达的下游实验部分，所以对上游的分析做的比较少，我找同事问了一下，他们给我一个网址，你可以到上面对你的蛋白进行一下测试。祝你成功
http://mips.helmholtz-muenchen.de/proso/proso.seam
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zhangjie2005
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-05-21 09:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +12 minht 2026-03-26 12/600 2026-03-27 22:22 by 无际的草原
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 322求调剂 +4 旧吢 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:38 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:52 by 醉在风里
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 312求调剂 +9 上岸吧ZJY 2026-03-22 13/650 2026-03-27 11:24 by sanrepian
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 材料277求调剂 +5 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-26 15:13 by zzll406
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭