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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 退火温度摸索
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晓颗

新虫 (初入文坛)

[求助] 退火温度摸索 已有2人参与

求大神指点  做RT-PCR  摸退火温度，引物设计时已经去除会出现引物二聚体情况，出现以下情形，求原因，，摸退火温度的条带有哪些要求，出现二聚体是不是就是小于100bp,,出现下图情况是否是cDNA不纯

退火温度摸索
5-5 17-7  2015-05-16 09 时 31 分.jpg


退火温度摸索-1
11全 6 后5个 14 前 5个2015-05-11 05 时 24 分.jpg
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1楼 2015-05-16 21:30:56
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小蚂蚁虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-18 09:15:26
引物二聚体一般都是小于100bp 你这个也有可能是退火温度太低 如果你是要做定量PCR你就要看你的酶在什么退火温度下活性最好 一般是60度条带单没有非特异性条带
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2楼2015-05-17 00:39:29
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-18 09:15:30
不一定得，我二聚体就做出过200BP但肯定得是，二聚体不会超过300。如过你只是检测阴阳性，不是绝对定量的话，不用态严格，能判断阴阳性就行了。

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采菊东篱下，悠然见南山。
3楼2015-05-17 18:02:02
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12195346119

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小蚂蚁虫 at 2015-05-17 00:39:29
引物二聚体一般都是小于100bp 你这个也有可能是退火温度太低 如果你是要做定量PCR你就要看你的酶在什么退火温度下活性最好 一般是60度条带单没有非特异性条带

这个就是没做定量之前摸温度，，，，用的酶是fast primer 里面的 mix  ，引物设计单子上退货温度就没有60 度，如果是60度的话，跑定量的话会不会太高了？
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的过多少次
4楼2015-05-18 20:43:58
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